Обобщение

Този протокол описва редовна поддръжка и грижи за поддържане на оптимални условия за отглеждане на зебра. Видеото показва протокола за поддръжка на системата, настаняване, хранене, размножаване и отглеждане на ларви на зебра.

Резюме

Протокол

1. Система за поддръжка

    Zebrafish се съхраняват в циркулационна система, която непрекъснато филтрира и проветрява водната система, за да поддържа качеството на водата, необходимо за здравословна водна среда. Циркулационната система също помага за филтриране на излишната храна и рибния тор. Системите Zebrafish се предлагат от различни компании, но ние използваме системи за водни местообитания, САЩ в нашата лаборатория. Температурата на околната среда или температурата на резервоара обикновено се поддържа между 26 и 28,5 ° C, а условията на осветление са 14:10 часа (светлина: тъмно). Система от водни местообитания на данио (напр. Система за маса) Разходи

110 mJ/cm 2 в началото на живота на лампата и скоростта на дозата намалява с течение на времето, което налага необходимостта от подмяна на балона, дори когато той изглежда все още функционира.

48 ч.
Забележка: Трябва да се отбележи, че необогатените саламурени скариди губят хранителна стойност на всеки час след излюпването. Следователно може да е подходящо или да се излюпи за 24 часа, или да се обогати повече от 48 часа, за да се получи максималната хранителна стойност от саламурените скариди.

  • Отпадъчните води от люпилната система се добавят към карантинните отпадъци, за да се дезинфекцират с белина и да се изхвърлят по-късно.
  • За да се съберат саламурените скариди, отстранете въздушната тръба и оставете културата да се утаи за 4-5 минути, но не повече от 10 минути. Излюпените саламурни скариди се събират на дъното на люпилото.
    1. Събирайте саламура от скариди, като използвате крана в долната част на инкубатора. Изхвърлете първоначалния поток, който се състои от неизлюпени саламурни яйца от скариди.
    2. След като изхвърлите неродените саламурни скариди, съберете излюпените саламурени скариди, които ще се използват като храна за рибата зебра.
    3. Отделете саламурените скариди от солената вода, като използвате мрежа за събиране на саламурени скариди (

      4. Отглеждане на ларви

        Оплодените яйца се държат в инкубатор (

      28,5 ° C) за 72 часа, докато ларвите се излюпят. Сега те са ларвите на хориона и свободното плуване е готово да се прехвърли в основен рибен резервоар. Ларвите трябва да се хранят 5 дни след оплождането (dpf) и се държат в средата на ембриони (състав, описан в част 3, 10) или водна система. Ларвите могат да се държат в кръгли чинии с

      50% или повече от водата в него се променя ежедневно. Смяната на водата трябва да включва отстраняване на мъртви или болни ларви и всякакви други отпадъци.

    4. Прехвърлете ларвите внимателно в резервоар, съдържащ преграда с малък размер (около 300-400 микрона). Мъртвите и болни ларви трябва да се отстраняват и да се добавят бавно всеки ден по няколко милилитра вода.
    5. След 14 дни резервоарите за ларви могат да бъдат подадени в системата и снабдени с малка струя циклична вода (1-2 капки в секунда). С нарастването на ларвите потокът от вода може да се увеличи. Могат да се използват различни размери на прегради в зависимост от размера на ларвите (напр. Размери на преградите 300-400, 500, 700-750 и 1000 микрона), а за възрастни риби трябва да се използва нормална пластмасова преграда.
    6. Обикновено отнема 3 месеца, докато ембрионите се развият в полово зрели възрастни.

    Представителни резултати

    Няколко критични проблема, които могат да възникнат в лаборатория за риба данио, включват запушване на водоснабдяването на отделни/всички резервоари в системата на корпуса, лошо качество на водата и течове в тръбите или резервоарите на циркулационната система. Освен това проблемите при получаването на ембриони от пило могат да бъдат друга причина за безпокойство. Отстраняването на тези проблеми е обсъдено по-долу.

    поддръжка

    Фигура 1. Илюстрация на мъжки зебра (A) и женски зебра (B, C).


    Фигура 2. Микроскопски изглед на саламурена скарида при 12X (A), единична саламурна скарида при 90X (B) и неоплодено яйце при 90X саламурена скарида (C).


    Фигура 3. Микроскопски изглед (16Х) на оплодени и неоплодени яйцеклетки, където само две неоплодени яйцеклетки, неоплодени яйцеклетки са обозначени с черни стрелки (А). Изглед с по-голямо увеличение (90X) на a. оплодено (B) и неоплодено яйце (C)


    Фигура 4. Женска риба зебра (яйцеклад) (обозначена с черната стрелка) Илюстрация.

    Параметър Оптимален обхват
    Алкалност 50-150 mg/L CaCO 3
    рН 06.08 до 07.05 (6.0-8.5 толерирани)
    Температура 26-28,5 ° С
    Твърдост 50-100 mg/L CaCO 3
    Нейонизиран амоняк 3 -) две -) 6,0 mg/L
    Соленост 0,5-1 g/L
    Проводимост 300 -1 500 mS

    Таблица 2. Параметри на качеството на водата. Параметри на качеството на водата. Оптимален диапазон от параметри на околната среда в аквариума на данио 11.

    Дискусия

    Zebrafish произхождат от река Ганг в Северна Индия и стават популярни в научните изследвания, както в техните възрастни, така и в личиночните фази 2, прегледани от Spence et al. 3. Zebrafish имат няколко предимства пред други животински модели като висока плодовитост, лекота на поддръжка, оптично почистване на ембриони, бързо ембрионално развитие и ниски разходи за поддръжка. Те са податливи на генетична манипулация 6 и са подходящи за откриване на високопроизводителни лекарства 4,5. Оплождането му е външно, което е изгодно за използване от биолози в развитието. Благодарение на тези благоприятни характеристики, зебрата набира популярност в генетичните 7, 8 фармакологични и поведенчески изследвания 9,10. Съществуват редица предизвикателства пред поддържането на съоръжение за риба зебра и отглеждането на риба зебра за ембриони. Тук описваме нашия опит и препоръки за справяне с тези предизвикателства и очертаваме протокол за поддръжка на системата, хранене и отглеждане на ларвите.

    Системна поддръжка

    Повечето системи за риба зебра използват хлорирана вода от чешмата, но някои системи използват дейонизирана вода. Важно е да се поддържа проводимостта на водата в системата между 300 и 1500 mS

    тъй като това намалява енергията, от която се нуждае рибата, за да задържи солите извън тялото. Следователно рибите данио не могат да се държат в дейонизирана вода, освен ако не се добавят соли, за да се поддържат оптимални нива на проводимост. Има риск от възможни високи концентрации на мед във водата на системата, ако се използва чешмяна вода, тъй като въглеродният филтър не отстранява медта. Следователно, uSERS трябва да провери дали концентрациите на мед и медни тръби избягват възможно най-много.

    Зебрата никога не трябва да се прехранва, тъй като това може да повиши нивата на нитрати във водата, което може да повлияе на размножаването им 11 или жизнеспособността им, тъй като някои риби могат да умрат поради преяждане. Препоръчва се да не се осигурява повече храна по време на едно хранене, отколкото рибният резервоар може да свърши за 10 минути. Много е важно да се отстрани солта от саламурата на скаридите, преди да се нахрани зебрата, тъй като излишната концентрация на сол причинява смърт. Ако са необходими повече яйца от зебра, рибите могат да се хранят три пъти на ден. Ежедневното почистване на резервоарите за отводяване също подобрява нивата на производство на яйца.

    Когато се храним във водни местообитания, обикновено изключваме водната помпа и въздушната помпа, за да позволим на рибите да ядат храната за 10 минути. Това намалява количеството храна, което се измива във филтрите. Потребителите обаче трябва да внимават да извършат повторна помощ, за да включат помпите отново по-късно.

    Зебраните обикновено са в оптимални условия за размножаване между

    Увеличението на ларвите

    Храненето на ларвите трябва да започне от 5 dpf (оплождане дни по-късно). Младите ларви могат да се хранят със суха храна

    С размер 100 микрона (напр. ZM100) или живи храни като парамеций и ротифери (което стимулира растежа). Бавният размер на храната може да бъде увеличен с 200 микрона (например ZM200) или 300/400 микрона (например ZM300). Популация от възрастни риби трябва да бъде около 7,6 риби на литър вода. Тази практика се препоръчва за по-добро поддържане на BOD (биологично потребление на кислород) в резервоарите.

    Разкриване

    Няма декларирани конфликти на интереси.

    Благодарности

    Авторите биха искали да благодарят на Тами Есмаили за помощта при управлението на лабораторните консумативи. AA е получател на докторска стипендия от Центъра за върхови постижения за изследване и грижи за болестта на Алцхаймер в Университетското училище за медицински науки Edith Cowan. MC Doctor получава финансова подкрепа от Ротари клуб, Пърт. AM, GV, KT и RNM се финансират от изследователската фондация на McCusker Alzheimer's.