Кратко описание

1 Катедра по биомедицински науки ИЗСЛЕДВАНЕ НА ПАТОГЕННИТЕ МЕХАНИЗМИ НА ХЕПАТИТ С И НЕЙНИТЕ ВРЪЗКИ.

катедра

Описание

Катедра по биомедицински науки

ИЗСЛЕДВАНЕ НА ПАТОГЕННИТЕ МЕХАНИЗМИ НА ХЕПАТИТ С и НЕГОВОТО ОТНОШЕНИЕ КЪМ РАЗВИТИЕТО НА СТЕАТОЗАТА. ЕФЕКТ НА АНТИОКСИДАНТНО ЛЕЧЕНИЕ С ФЛАВОНОИДИ

Доклад, представен от бакалавър по биология Сандра Писонеро Вакеро за придобиване на докторска степен от Университета на Леон Леон, 2014 г.

ДОКЛАД ОТ ДИРЕКТОРИТЕ НА ТЕЗАТА

Д-р Мария Виктория Гарсия Медиавила и д-р Соня Санчес Кампос, като директори на докторската дисертация, озаглавена „Изследване на патогенните механизми на хепатит С и връзката му с развитието на стеатоза. Ефект от антиоксидантно лечение с флавоноиди ", извършено от Dña. Сандра Писонеро Вакеро, в докторската програма по биомедицина, отчита положително депозита си, тъй като отговаря на необходимите условия за неговата защита. Какво подписват, в Леон на _____ от _____, 2014 г. Директорите на докторската дисертация, подписани: Д-р Mª Виктория Гарсия Медиавила Подписани: Дра. Соня Санчес Кампос

ПРИЕМ ЗА ОБРАБОТКА НА ДОКТОРСКАТА ТЕЗА Органът, отговорен за докторската програма по биомедицина, на своето заседание, проведено на _____ деня на 2014 г., се съгласи да даде съгласието си за допускане до процеса на четене на докторската дисертация, озаглавена „Изследване на патогенните механизми на хепатита С и връзката му с развитието на стеатоза. Ефект от антиоксидантно лечение с флавоноиди ”, режисиран от д-р. Г-жа Мария Виктория Гарсия Медиавила и г-жа Соня Санчес Кампос, изготвени от г-жа Сандра Писонеро Вакеро и чието заглавие на английски е следното: „Изследване на механизмите, свързани с развитието на стеатоза, свързана с хепатит С. Ефекти от антиоксидантното лечение с флавоноиди ".

Това, което подписвам, в Леон на ___, ______, 2014 г.

Подписано: Дра Мар Мар Алмар Галиана

Председателят на Академичната комисия, подписан: Д-р Mª Jesús Tuñón González

Всички резултати, представени в този доклад, както и други, възникнали по време на периода на завършване на докторската дисертация, са предмет на следните публикации: Модулация на PI3K-LXRα-зависима липогенеза, медиирана от оксидативен/нитрозативен стрес, допринася за инхибиране на репликация на вируса на хепатит С чрез кверцетин. Pisonero - Vaquero S, García - Mediavilla MV, Jorquera F, Majano PL, Benet M, Jover R, González‐ Gallego J, Sánchez - Campos S. Laboratory Investigation 94 (3): 262‐74, 2014, 2014 ген, свързващ киселинния протеин (FABP1), се активира от FOXA1 и PPARα; и потиснати от C/EBPα: Последствия при FABP1 надолу - регулиране при неалкохолна мастна чернодробна болест. Guzmán C, Benet M, Pisonero - Vaquero S, Moya M, García - Mediavilla MV, Martínez - Chantar ML, González - Gallego J, Castell JV, Sánchez - Campos S, Jover R. Biochimica et Biophysica Acta - Molecular and Cell Biology of Липиди 1831 (4): 803‐18, 2013 Регулатор на липогенезата на липогенезата с рецептор на черен дроб X чрез ядро ​​и протеини NS5A допринася за индуцирана от HCV чернодробна стеатоза и репликация на HCV. García - Mediavilla MV, Pisonero - Vaquero S, Lima - Cabello E, Benedicto I, Majano PL, Jorquera F, González - Gallego J, Sánchez - Campos S. Laboratory Investigation 92 (8): 1191‐202, 2012

Финансиране По време на завършването на тази докторска дисертация, Сандра Писонеро Вакеро бе бенефициент на грант от Министерството на образованието за обучение на университетски учители (FPU, AP2009-4484) от Националната програма за обучение в областта на човешките изследвания в рамките на Националния план за R + D + I (2008-2011), водещ до обучение на учители и научни изследвания в рамките на Устава за изследователски персонал в обучение, както и до получаване на споменатото финансиране, помощ, насочена към финансиране на набирането на изследователски персонал с Скорошна университетска степен, в рамките на Регионалната стратегия за научни изследвания, развитие, технологии и иновации 2007-2013 (Министерство на образованието, Junta de Castilla y León), съфинансирана от Европейския социален фонд. Освен това, тази докторска дисертация е част от проекта: "Роля на ядрения рецептор LXRα и на основните липогенни и възпалителни гени в развитието и развитието на стеатозата при in vitro модели на хепатит С. Ефект от лечението с кверцетин". Национален план за R + D + I на Министерството на образованието и науката, Програма за фундаментална биология. 2010‐2012 (BFU2010‐15784/BFI).

„Нашата награда е в усилията, а не в резултата. Общо усилие е пълна победа ”Махатма Ганди

„Какво голямо богатство, дори за някой беден, да има добри родители“

единственият човек, който успя да ме накара да говоря малко английски. И на моя Сарий, за заливането на офиса от радост, за онези кафета на слънце да зареждат батериите, за натискането му, когато имах нужда от тях, за такива добри времена в и извън лабораторията и за това, че бях толкова близо на 9000 км. На Мария Хосе, Луди, Хектор и всички останали хора в IBIOMED и Катедрата по физиология, за възможността да получавам помощта им, когато имах нужда; и особено на Хосе Луис, от когото се обадих един хубав ден и не знам как той ме накара, че днес пиша признанията за докторска дисертация. И разбира се, искам да благодаря на моите приятели и особено на семейството ми за безусловната им подкрепа, за насърчението им в най-трудните моменти и за това, че винаги съм оценявал толкова много това, което правя. Благодаря на всички ви

Съкращения и символи

АТФ (аденозин трифосфат) свързваща казета

Допълнителна дезоксирибонуклеинова киселина

Свободни мастни киселини

Протеин киназа В

Алфа миши черен дроб 12

Аденозин монофосфат активирана протеин киназа

Анализ на дисперсионния тест

Messenger рибонуклеинова киселина

Активиране на транскрипционен фактор 6

Клъстер на диференциация 81

Въглехидратен елемент, свързващ елемент, свързващ протеин

Карнитин палмитоил трансфераза

Агенти, които действат директно върху вируса

Директно повторение с 4 нуклеотидни спейсъра

Стандартна грешка на средната стойност

Фактор за иницииране на транслация при еукариоти

Имунособентен анализ, свързан с ензимите

Разграждане, свързано с ендоплазмения ретикулум

Реактивни азотни видове

Реактивни кислородни видове

Елементи на стресовата реакция на ендоплазмения ретикулум

Синтаза на мастни киселини

Протеин, свързващ мастни киселини

CD36 транслоказа на мастни киселини

Белтък-носител на мастни киселини

Администрация по храните и лекарствата

Farnesoid X рецептор

Липопротеин с висока плътност

3-хидрокси-3-метилглутарил коензим А редуктаза

Протеин от топлинен шок

Индуцируема азотна оксидна синтаза

Индуциран от инсулин ген

Вътрешно място за влизане в рибозомата

Ензим 1, изискващ инозитол

Дълговерижна ацил-КоА дехидрогеназа

Липопротеин с ниска плътност

Чернодробен Х рецептор

Елемент за отговор към LXR

Меланокортинов рецептор 4

Средноверижна ацил-КоА дехидрогеназа

Дефицит на метионин и холин

Целта на рапамицин в клетките на бозайници

Микрозомален триглицериден транспортен протеин

3‐ (4,5 - диметилтиазол - 2 - ил) ‐2,5 - дифенилтетразолиев бромид

Безалкохолна мастна чернодробна болест

Безалкохолен стеатохепатит

Ядрен фактор kappa B

Солен фосфатен буфер

Полимеразна верижна реакция

Ендоплазматична ретикулумна протеин киназа

PPAR Коактиватор 1

Фосфоинозитол 3 киназа

Протеин киназа А

Рецептор, активиран от пролифератор на пероксизом

Микро прекурсорни РНК

Първични микро РНК

Фосфатаза и тензин хомолог

Количествена PCR в реално време

РНК-индуциран шумозаглушаващ комплекс

Обратна транскрипция - количествена PCR в реално време

Устойчив вирусологичен отговор

Ретиноиден X рецептор

SREBP разцепващ активатор протеин

Натриев додецил сулфат

Малка РНК интерференция

Приемник за чистач от клас I тип I

Стерол регулиращ елемент

Стерол регулаторен елемент, свързващ протеин

Тумор некротизиращ фактор алфа

Елементи на отговор на разгънати протеини

Непреведен регион

Вирус на хепатит С

ХИВ

Много дълговерижна ацил-КоА дехидрогеназа

Липопротеин с много ниска плътност

X-box свързващ протеин 1

Индекс на съдържанието

Списък на фигурите. V Списък на таблици. VII ВЪВЕДЕНИЕ И ЦЕЛИ. 9 ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ. 7 2.1. Хепатит С . 9 2.1.1. Въведение . 9 2.1.2. Разпространение 10 2.1.3. Предаване . 2.1.4. Вирусът на хепатит С. 11 2.1.4.1. Геном. 11 2.1.4.2. Влизане на вируса. 13 2.1.4.3. Репликация и превод. 14 2.1.4.4. Вирусно сглобяване и освобождаване. 14 2.1.4.5. Генотипове. 15 2.1.4.6. Рекомбинация. 2.1.5. Патогенеза на заболяването. 16 2.1.5.1. Ретикулум стрес и отговор на разгънати протеини (UPR). 2.1.5.2. Автофагия 18 2.1.5.3. Апоптоза 19 2.1.5.4. Арест на клетъчния цикъл и митогенно сигнализиране за увреждане на ДНК. Път на фосфоинозитол 3 киназа (PI3K). 19 2.1.5.5. Митохондриална дисфункция. 20 2.1.5.6. Имунен отговор и възпаление. 21 2.1.5.7. Липиден метаболизъм. 22 2.1.5.8. Роля на miRNAs. 24 2.1.6. Диагностика на HCV инфекция. 26 2.1.7. Лечение. 27 2.1.8. In vivo и in vitro модели за изследване на хепатит С. 30 2.2. Стеатоза 32 2.2.1. Въведение . 32 2.2.2 Патогенеза и хистопатология. 32 2.2.3. Регулиране на липидния метаболизъм. 34 2.2.3.1. De novo липогенеза. 3. 4

Фигури 22. Ефект от лечението с кверцетин или IFNα върху производството на супероксиден анион и върху липидната пероксидация в HCV-G1 клетки. . 108 Фигура 23. Ефект от лечението с кверцетин или IFNα върху интрацитоплазматичното натрупване на липиди в HCV-G1 клетки. . 111 Фигура 24. Ефект от лечението с кверцетин или IFNα върху експресията на FAS в HCV-G1 клетки. . 112 Фигура 25. Ефект от лечението с кверцетин или IFNα върху експресията на LXRα в HCV-G1 клетки. . 113 Фигура 26. Индукция на свръхекспресия на LXRα чрез аденовирусна инфекция. . 115 Фигура 27. Ефект от лечението с кверцетин или IFNα върху свръхекспресията на LXRα и върху интрацитоплазменото натрупване на липиди в клетки Huh7 Ad-0.5. . 117 Фигура 28. Ефект от лечението с кверцетин или IFNα и LY294002 върху LXRα-зависима липогенеза, медиирана от PI3K/AKT пътя в HCV-G1 клетки. . 119

Списък на таблици Таблица 1. Праймери и сонди, използвани в qPCR за изследване на липогенни гени. . 76 Таблица 2. Праймери, използвани в qPCR за изследване на HCV репликация. . 77 Таблица 3. PCR праймери по избор за ChIP анализа. . 83

ВЪВЕДЕНИЕ И ЦЕЛИ

Сандра Писонеро Вакеро 2.1.2. Разпространение Хепатит С вирусът има разпространение в световен мащаб и засяга хора от всяка възраст, пол, раса или регион по света. Приблизително 130-170 милиона души, или 2-3% от световното население, са заразени с вируса на хепатит С. Глобалното разпространение на хепатит С е показано на фигура 1. Смята се, че има около 400 000 хронично заразени в Австралия и Океания, 14 милиона в Америка, 16 милиона в Близкия изток, 28 милиона в Африка и 83 милиона в Азия (21). Приблизително 9 милиона души в Европа са заразени с HCV, като разпространението се увеличава в източните и южните региони (23). Само в Испания се смята, че има около 800 000 заразени (24). Разпространението на HCV сред африканското население варира между 0,1% и 17,5% в зависимост от страната. Страните с най-голямо разпространение са Египет (17,5%), Камерун (13,8%) и Бурунди (11,3%). Страните с най-ниско разпространение включват Замбия (0,2%), Кения (0,9%), Малави (0,7%) и Южна Африка (0,1%) (25).