Вижте статиите и съдържанието, публикувани в този носител, както и електронните резюмета на научни списания към момента на публикуване

Бъдете информирани по всяко време благодарение на сигнали и новини

Достъп до ексклузивни промоции за абонаменти, стартиране и акредитирани курсове

Revista Mexicana de Oftalmología (RMO) е официалната публикация на Мексиканското дружество по офталмология. Това списание е резултат от сливането на списанията: Анали на Мексиканското общество по офталмология, Архиви на Асоциацията за избягване на слепота в Мексико и Бюлетин на офталмологичната болница в Нуестра Сеньора де ла Луз. RMO публикува на испански или английски език непубликувани и оригинални научни статии, рецензионни статии, доклади за клинични случаи, бележки по свързани теми, писма до редактора и специални раздели, последните изключително с покана, свързани с клинични, хирургични, епидемиологични и основни аспекти на офталмологията.

Индексирано в:

SCOPUS, EMBASE, EXCERPTA, LILACS и PERIODICA

Следвай ни в:

CiteScore измерва средния брой цитати, получени за публикувана статия. Прочетете още

SJR е престижна метрика, базирана на идеята, че всички цитати не са равни. SJR използва алгоритъм, подобен на ранга на страницата на Google; е количествена и качествена мярка за въздействието на дадена публикация.

SNIP дава възможност за сравнение на въздействието на списанията от различни предметни области, коригирайки разликите в вероятността да бъдат цитирани, които съществуват между списанията на различни теми.

  • Обобщение
  • Ключови думи
  • Резюме
  • Ключови думи
  • Въведение
  • Обобщение
  • Ключови думи
  • Резюме
  • Ключови думи
  • Въведение
  • материали и методи
  • Резултати
  • Дискусия и интерпретация на резултатите
  • Заключения
  • Финансиране
  • Конфликт на интереси
  • Благодаря
  • Библиография

реакция

Лабораторните методи, използвани за диагностика на блефарит, конюнктивит и кератит, включват от нови изследвания за търсене на паразити, петна върху микробиологични култури, които могат да отнемат до 2 седмици, за да се получи резултатът.

Прилагане на PCR за откриване на грам-положителни и грам-отрицателни бактерии и гъби, като се използва метод, докладван по-рано и адаптиран към условията на лабораторията за молекулярна биология на Centro de Investigación Biomédica de La Fundación Hospital Nuestra Señora de la Luz I.A.P. (CIB-HOL), използвайки термичен цикъл Axygen/Maxygene.

Извършена е екстракция на ДНК от микробиологични култури на грам-положителни, грам-отрицателни бактерии и гъби. Направени са серийни разреждания, за да се определи чувствителността на метода. PCR е извършена за гъбички и бактерии. Търсени са общи условия за извършване на едноетапна PCR.

С помощта на разрежданията на ДНК се получава амплификационен продукт, като се използва количество от 0,12 ng бактериална ДНК и 0,15 ng гъбична ДНК.

Техниката PCR е много важен инструмент за откриване на ДНК на бактерии и гъбички, които причиняват очни инфекции. Той позволява да се усили генетичният материал на етиологичния агент и улеснява неговото наблюдение, като резултатите се получават за по-малко време, отколкото при конвенционалните техники.

Лабораторните методи, използвани за диагностика на блефарит, конюнктивит и кератит, вариращи от нови изследвания до търсене на паразити, грамово оцветяване и микробиологични култури, могат да продължат до две седмици, за да се получи резултатът.

Да се ​​приложи PCR за откриване на гъбички и грам-положителни и грам-отрицателни бактерии с помощта на докладван по-рано метод, адаптиран към лабораторията за молекулярна биология в Биомедицинския изследователски център, болница Fundación Nuestra Señora de la Luz I.A.P. (CIB-HOL), като се използва термоциклер Axygen/Maxygene.

ДНК от микробни култури на Грам положителни, Грам отрицателни и гъби са получени за PCR. Бяха проведени серийни разреждания, за да се определи чувствителността на метода. PCR е извършена за гъбички и бактерии. Търсихме общи условия за PCR в една стъпка

Когато използвахме разреждания на ДНК, PCR беше чувствителен до 0,12 ng към бактериална ДНК и 0,15 ng към ДНК гъбична.

Техниката PCR е много важен инструмент за молекулярна биология за откриване на ДНК от бактерии и гъбички, отговорни за очните инфекции. Този метод позволява амплифициране на генетичния материал на етиологичния агент и резултатите се получават за по-малко време, отколкото при използване на конвенционални техники.

Окото е органът, отговорен за улавянето на светлината, което е първоначалният процес на зрение и поради анатомичното си положение то е постоянно изложено на различни патогени. Той обаче има система за производство на вещества, включително сълза, която съдържа голям брой химични съединения, като цитокини, ензими, липиди и електролити, способни да образуват имунна бариера за спиране на всеки микроорганизъм, който може да генерира инфекция 1 . Произходът на очната инфекция може да бъде продукт на травма, хирургическа намеса, използване на контактни лещи и други заболявания, при които имунната система е нарушена, улесняваща развитието на причинителите. Очните инфекции се причиняват от бактерии, гъбички, вируси или паразити. Има много видове очни инфекции и сред най-честите можем да споменем конюнктивит, кератит и блефарит или хронично възпаление на клепачите, причинено главно от стафилококи. 2–4 .

Очните операции, които включват роговицата, имат известен риск от инфекция от микроорганизми, които обикновено обитават очната повърхност. Съобщено е, че най-често изолираните микроорганизми са грам-положителни бактерии, S. epidermidis заема първо място по честота, което идва от обичайната флора на очната повърхност 5,10,11 .

Има и други заболявания, които са свързани с риска от инфекция на очите. Сред болестите, които включват промяна на епител на роговицата, можем да споменем автоимунни заболявания като щитовидна орбитопатия, синдром на Sjögren и пемфигоид, наред с други. Системни заболявания като захарен диабет, колагенови заболявания, метаболитен синдром или състояния, които включват имуносупресивна система, също предразполагат към развитието на инфекциозен кератит поради намалена хуморална и/или клетъчна защита 5,12–14 .

По принцип микроорганизмите, които са замесени като причинители на конюнктивит, блефарит и инфекциозен кератит, са от бактериален произход, предимно грам-положителни 5. Гъбите представляват около 5-30% от случаите, а по отношение на паразитите отчетените проценти са по-ниски и 1-15% се приписват на тях. Най-често срещаният паразит, който причинява блефарит, е Demodex folliculorum, докато паразитният кератит е свързан с Acanthamoeba sp 5,15,16 .

Лабораторните методи, използвани за диагностика на блефарит, конюнктивит и кератит, варират от нови изследвания до търсене на паразити и петна до микробиологични култури, които могат да отнемат до 2 седмици, за да се получи резултат 17,18. Наличието на микроорганизми може да бъде в много малки количества и това зависи от клиничното представяне на инфекцията; Например, откровени абсцеси на роговицата могат да се появят при по-лениви форми като кристална кератопатия, при която може да се открие интрастромален инфилтрат, но с минимален възпалителен отговор и недостатъчна проба за извършване на класическа микробиология 19–23. Поради това са разработени методи за молекулярна биология за микробиологична диагностика 24–26. Директната полимеразна верижна реакция (PCR) се използва за вируси, бактерии, гъбички и паразити; Вложен PCR за бактериална идентификация; и PCR в реално време за всички видове микроорганизми 27–31 .

През 2000 г. Jaegger et al. и Carrol et al. описа PCR метод за откриване на гъбички и бактерии, съответно, в проби от очна течност 32,33. Тези работи отчитат висока чувствителност на метода, нещо много важно при диагностицирането на очната микробиология поради оскъдното количество биологичен материал, който може да бъде получен в офталмологична проба, но е необходимо всяка лаборатория да стандартизира условията на работа, за да да получат задоволителни резултати. Целта на настоящата работа е да възпроизведе тези техники за откриване на гъбички и бактерии, като се получат подходящите условия за това в една програма, като се използват едни и същи условия за откриване както на бактерии, така и на гъбички; Това би съкратило времето до резултати, които биха били от полза за пациента да получи бърз и надежден резултат. Работата е извършена в лабораторията за молекулярна биология на Центъра за биомедицински изследвания на болница Fundación Nuestra Señora de la Luz I.A.P. (CIB-HOL).

материали и методи

За вложената PCR бяха използвани амплификационни продукти, получени от PCR за бактерии; Условията бяха: 95 ° C/10 минути, след това 32 цикъла с температури 94 ° C/30 s, 61,4/1 min, 72 ° C/30 s и накрая температура на удължаване от 72 ° C/3 минути. Всички PCR продукти бяха идентифицирани чрез електрофореза с 1,5% агарозен гел, използвайки условията от 90 V за 40 минути и Gelred 10X, за да го визуализират в UVP BioLite трансиллюминатор, с UV светлина при 302 nm.

От бактериалната суспензия получената концентрация на ДНК е 4 ng/μl, докато за гъбичната ДНК е 5 ng/μl; 3 µl (12 ng) бактериална ДНК и 3 µl (15 ng) гъбична ДНК бяха използвани за PCR. Получени са задоволителни резултати, като се използва съобщеният Tm за всяка PCR. PCR продуктът за бактерии е приблизително 1300 bp и програмата в термоциклера продължава 3 часа и 20 минути (фиг. 1). За гъбичната PCR се получава амплификационен продукт от приблизително 700 bp и времето на програмата за PCR изпълнение в термоциклера е 3 h и 20 min (Фиг. 2). В температурния градиент PCR, за да се извърши PCR на гъбички и бактерии в едно изпълнение, най-добрите условия бяха: 95 ° C/10 минути, 35 цикъла с температури 94 ° C/1 min 56 ° C/1 min, 72 ° C/1 min и накрая температура на удължаване от 72 ° C/7 min с продължителност 3 h и 10 min. С Tm от 56 ° C, както гъбичната, така и бактериалната ДНК могат да бъдат усилени.