Андски закон 1994; 3 (2): 125-135

действие

ДЕЙСТВИЕ НА ПРОЛАКТИНА НА НИВА НА
ПЛАЗМАТИЧЕН ЕСТОСТЕРОН ПРИ ПЛЪХОВЕ, ПРЕДМЕТ НА ВИСОКА ХИПОКСИЯ

Елидия Мухика

След 28 дни лечение се определят теглото на тялото и тестисите, както и плазменият пролактин (PRL) и тестостерон (T) от
радиоимуноанализ (RIA) и промяна на тестисите (% AT) чрез светлинна микроскопия.

Животните в надморска височина представят по-високи серумни нива на PRL и T, както и по-високи% AT от NM. Както контролните, така и експерименталните животни, вдигнати на височина, намаляват телесното тегло спрямо морското равнище, но не и това на тестисите. Няма допълнителни вариации в телесното тегло, тестисите и% TA поради прилагането на бромокриптин и сулпирид.

Намерена е полигонална корелация между плазмените нива на PRL и Т, като се наблюдава, че хипо и хиперпролактинемията са свързани с ниски нива на Т.
В заключение, острата хипоксия на височина води до увеличаване на секрецията на тестостерон от тестисите при плъхове, което би зависело, поне частично, от повишаване на нивата на пролактин.

Пролактинът (PRL) е протеинов хормон, синтезиран в еозинофилните клетки на хипофизната жлеза и регулиран от хипоталамусния допамин, който инхибира секрецията му (1-3). PRL е необходим за правилното функциониране на мъжките и женските репродуктивни пътища (1-28). В тестиса действието му се оказва върху клетките на Leydig, повишавайки чувствителността към LH за секрецията на тестостерон (Т) (29-33) и. действащи на нивото на усвояване на кислорода от сперматозоидите (34); също е описано инхибиторно действие върху пулсиращата секреция на лутеинизиращ хормон (35, 36).

Хиперпролактинемията при мъжете поражда поредица от нарушения, които показват андрогенен дефицит като хипогонадизъм, импотентност, намалено либидо, олигозоослермия и безплодие (2, 4, 5, 13, 1624, 26-28). Други доклади също приписват на промени в хипопролактинемията в репродуктивната функция на мъжете при животни (13, 7, 3740) и при хора (41).

От друга страна е известно, че излагането на надморска височина влияе върху хипофизно-тестикуларната функция както при хората, така и при животните (42-50). От друга страна, местните жители, като тези, които остават за дълги периоди, показват адаптация към височината (44, 45, 51-54), отразена в адекватна плодовитост. Различни доклади показват, че при остро или хронично излагане на надморска височина има промени в хормоналния отговор (47,45-57); по този начин при нормални мъже, подложени на хронична хипоксия, нивата на PRI и техният максимален отговор на интравенозна ХЗТ намаляват (58), докато периодичното излагане на височина не показва разлики в изходните нива на PRI, серум (59).

Изследванията върху животни са дали противоречиви резултати. Съобщава се, че PRL има стимулиращ (14, 60-62), инхибиторен (13, 24, 27, 28, 63, 64) и двуфазен ефект върху Т секрецията (33).

При експериментална хипопролактинемия, дължаща се на приложение на бромокриптин при гризачи, някои публикации показват, че има инхибиране на секрецията на Т, свързано (25, 39) или не (65) с хипогонадизъм и други, че повишава секрецията на Т (38). Прилагането на сулпирид, който повишава нивата на PRL, от своя страна увеличава нивата на Т (66). Атрофия на тестисите е наблюдавана при хиперпролактинемия, постигната с други експериментални методи (13,27,28).

Следователно, ние също така поставихме за цел да прегледаме ефектите, които хипо- и хиперпролактинемията, произведена при плъхове от прилагането на бромокриптин и сулпирид (Dogmatil, Spedrog), за които е известно, че инхибират (67) и стимулират (66) секрецията на PRL, върху тестисите функция на морското равнище (150 m), за да се изследват ефектите на тези лекарства, прилагани на плъхове, издигнати на височина (4540 m), върху плазмените нива на PRL, T и върху хистологията на тестиса.

Използвани са мъжки плъхове от щама Biologнa Andina. Всички са родени и израснали в Лима до средната възраст от 70 дни (тегло между 200 и 300 грама), в която една група (ALT) е била отведена в град Морокоча (4540 м) за 28 дни. На тази възраст мъжкият плъх се счита за полово зрял и се получава най-високо ниво на плазмен тестостерон (12).

Животните бяха държани в предварително кондиционирано помещение с контролируема температура, средно 22 ° C, получаващи цикли от 12 часа светлина и 12 часа тъмнина. Те са получавали вода ad libitum и са били хранени с балансирани продукти: угояване (Nicovita), избягвайки стрес, доколкото е възможно, за което е известно, че стимулира секрецията на пролактин (68).

За да ги обезкърви, животното се поставя в камера, където се анестезира с етерни пари в продължение на 2 минути и пробата се взема чрез пункция на очната вена под долния ъгъл на окото. Етерът е избран като упойка, която повишава нивата на базовия пролактин, подобно на други анастици, но го прави в по-малка степен, в зависимост от времето на експозиция. Избраното време е това, което засяга най-малко и няма съпътстващите ефекти на повечето анестетици (69).

Бяха проведени два вида експерименти, всеки със своя контролна група:


Експериментална група I: Животни, на които е прилаган бромокриптин (2 Br-a -ергокриптин): CB-154-Sandoz, в доза от 4 mg/kg. телесно тегло в 0,5 ml 0,9% с.с. физиологичен разтвор, в дни 0, 7, 21 и 28 от експеримента, за да се получат хипопролактинамични плъхове.

Контролната група получи 0,5 ml 0,9% s.c. физиологичен разтвор. в същото време.

Тази доза CB-154 е избрана, поради доказателства, че тя води до намаляване на пролактина за 7 дни, за разлика от други по-ниски дози (67).

На морското равнище бяха използвани 70 животни, 35 получиха бромокриптин и 35 0,9% физиологичен разтвор. Всяка група от 35 животни беше произволно поставена в клетки, съставени от 5 животни, образувайки 7 групи, номерирани от 1 до 7.

На височина бяха използвани 50 животни, 25 получиха бромокриптин и 25 0,9% физиологичен разтвор. Всяка група от 25 животни беше поставена на случаен принцип в клетки, съставени от 5 животни, имащи 5 групи, номерирани от 1 до 5.

На 7, 14, 21 и 28 дни, след първото инжектиране, животните се претеглят, взема се кръвна проба и от всяка група (клетка) по едно животно се жертва на случаен принцип, за да се извлекат тестисите, Претеглете го и го фиксирайте в разтвора на Bouin и да бъде изпратен в хистологичната лаборатория за подготовка на предметните стъкла за оптична микроскопия.

От всяко животно се получават приблизително 0,5 ml. на кръв. Всяка проба за анализ представлява "локвата" от кръвта на 5 животни, поставени на случаен принцип в една и съща клетка и представляващи група. По този начин се получава достатъчно проба за извършване на анализите. Пробите се центрофугират и плазмата се поддържа замразена (-20 ° C), докато се определят пролактинът и тестостеронът чрез радиоимуноанализ (RIA).


Експериментална група II: Животни, на които е прилаган сулпирид (N- (1 етил-2 пиролидил-метил) -2 метокси-5 сулфамоилбензамид) Догматил-Спедрог, в доза 1,5 mg/kg телесно тегло в 0,5 ml 0,9 физиологичен разтвор% im два пъти седмично в продължение на месец, за да се получат хиперпролактинамични плъхове (66).

На морското равнище са проучени 50 животни, 25 са получили сулпирид и 25 физиологичен разтвор 0,9% im, също разпределени в клетки в групи от 5. На 7, 14, 21 и 28 дни, след първото инжектиране, животните са изследвани подобно на това описани за експеримента с Бромокриптин.

Хормоните са измерени чрез радиоимуноанализ (RIA).


Измерване на пролактин

Реагентите са предоставени от А. Ф. Парлоу от Националния институт на
Здравна (NIH/NIAMD) програма за хипофизен хормон на плъхове на д-р Matilde de Bernal от Лабораторията по репродуктивна физиология на Универсидад дел Вале, Кали-Колумбия и дарена от нея за тази работа.

Етикетирането на пролактин на плъхове (NIAMD-Rat-Prolactin I-2) се извършва с I-125 по метода хлорамин Т. Белязаният хормон се пречиства, като се получава PRL, 1-125 с най-висока имунореактивност и чистота, със специфична активност между 100 и 200 inCi/nM.

Плазмени проби бяха анализирани с използване на заешко антипролактиново антитяло (NIAMD-an-плъх-Пролактин-S-4). Разделянето на свободната от свързаната фракция се извършва чрез утаяване с второ антитяло, анти-заешки овчи гама глобулин (антитела, включени). Получените резултати в пробите се сравняват чрез директно отчитане на стандартна крива, получена с референтен пролактин (NIAMDRP-1). Получените стойности се изразяват като ng NIAMD-RPI/нула плазма. Коефициентът на вариация в рамките на интра- и междинния анализ е съответно 3,2% и 8,2% в диапазона от 03200 ng/ml.


Измерване на тестостерон

Използвани са реагенти, предоставени от Световната здравна организация на д-р Матилде де Бернал от Универсидад дел Вале, Кали Колумбия, като част от програмата: „WHO Matched Reagent Program“ и дарени от нея за тази работа. Плазмата (0,1 ml) се екстрахира с етер и екстрактите реагират с анти-тестостероново антитяло (OMS). Свързаната фракция се преброява в течен сцинтилационен брояч. Резултатите бяха отчетени от стандартна крива след корекция за възстановяване. Коефициентът на вариация в рамките на интра- и междинния анализ е съответно 4,5% и 7,3%, в диапазон от 0,1-40 ng/ml.


Процедура за фиксиране на тестисите:

Веднага след екстракция и претегляне тестисите се поставят цели в разтвор на Bouin (пекринова киселина: 15 ml, 40% формалдехид: 5 ml, оцетна киселина Q.P: 1 ml). Един час по-късно стълбовете бяха изрязани и след 2 часа беше направено напречно сечение, оставяйки го в този разтвор за 24 часа. След това време се извършва непрекъснато измиване с водна струя за още 24 часа; след това те бяха поставени в 50% алкохол за 6 часа, по-късно го прехвърлиха на 70% алкохол, където останаха, докато не бяха изпратени в хистологичната лаборатория за монтиране и оцветяване с хематоксилин-еозин.

Промяната, представена от тестисите, се изразява като броя на тубулите на поле, които представят някакъв вид промяна, изразена като процент (% AT). 100 тубули бяха оценени на предметно стъкло.


Статистически анализ

Резултатите бяха анализирани с помощта на дисперсионен анализ, регресионен анализ и тест „t“ на Student за сдвоени данни. Стойности, равни или по-малки от 0,05, се считат за статистически значими.

Тегло на тялото и тестисите:

Излагането на височина на възрастни мъжки плъхове намалява телесното тегло на 7-ия ден от експозицията и причинява увреждане на тестисите, което се описва като отделяне и дезорганизация на зародишния епител, наличие на многоядрени клетки и удебеляване на съдовете, както и нормална популация на Leydig клетки; сперматогенезата се запазва в неповредени тубули. Не се наблюдават промени в теглото на тестисите при излагане на височина.

Процентите от хормоналните стойности, получени от контролните животни на ALT, третирани с бромокриптин или сулпирид при ML или ALT, се отнасят към средната стойност на стойностите през целия експеримент (7, 14, 21 и 28 дни) от контроли в ML., и които се считат за 100%.

При плъхове, лекувани с бромокриптин на морско ниво, наддаването на телесно тегло е по-малко, отколкото при нелекуваните; На 28 дни контролите на морското ниво набраха 32% от първоначалното си телесно тегло, а тези, лекувани с бромокриптин, само 17%. На 21 дни теглото на тестисите на животни, третирани с бромокриптин на морското равнище, е по-голямо от това на 14 дни (p Таблица 1).


Ефекти на бромокриптин на морско равнище (SL) и надморска височина (ALT)

На 7 дни бромокриптин се прилага подкожно в доза от 0,4 mg/kg телесно тегло. При плъхове, изложени остро на ALT, той не променя плазмените нива на PRL, което се постига с дозата от 4 mgr/kg (p Таблица 2). Бромокриптин (4 mg/Kg), прилаган на плъхове при ML намалява плазмените нива на PRL, като е значителен (p Таблица 3).


Ефект на сулпирида при NM и ВИСОЧИНА

Сулпирид, прилаган на плъхове на морско ниво, постепенно повишава плазмените нива на PRL (p Таблица 4).


Плазмени нива Т според плазмените нива на PRL

В Таблица 5 наблюдаваме, че има увеличение на плазмения Т паралелно на нарастването на нивата на PRI, плазматични както на морското равнище, така и на височина, до концентрации на PRI между 41-60 ng/ml. Над тези плазмени нива на PRL, плазмените Т стойности са склонни да намаляват.

За да се определи дали плазмените нива на PRI и Т влияят на плазмените нива на Т, е извършена корелация между концентрациите на PRL и Т, като се използват данни, получени на морското равнище и на височина при контролни и лекувани плъхове, като се установи полигонална корелация. (Y = 5 sin2x, r = 0,876, стр

PRL е необходим за нормалната функция на тестисите и нормалния растеж на допълнителните полови органи. На ниво тестиси PRL увеличава и поддържа LH рецептори, действайки синергично с LH при секрецията на тестостерон (Т). На нивото на половите органи той би действал синергично с Т, директно или би увеличил превръщането на Т в дихидротестостерон (DHT) в прицелната тъкан (29-33, 70, 71).

Острата експозиция на височина при мъже (45,46,85) и животни (42-44,56, 72, 76-84) води до промени в функцията на мъжките полови жлези, като увреждането на тестисите се проявява чрез промени в сперматогенезата като олигозооспермия и азооспермия; намалено тегло на тестисите при плъхове (49, 50, 80, 82) и повишена плазмена Т при мъже (86) и животни (56).

В тази работа ние изучаваме ефекта, който височината оказва върху плазмените нива на PRL, като ги свързваме с плазмените нива на Т и ги сравняваме с тези на морското равнище. За да се получат нива
нисък и висок PRL, използваме съответно приложението на бромокриптин и сулпирид. Бромокриптин стимулира допаминовите рецептори на ниво хипоталамус и хипофиза и следователно инхибира секрецията на пролактин, показвайки при мъжки плъхове също намаляване на нивата на
тестостерон (67,89). Сулпиридът блокира допаминовите рецептори (66) и в допълнение към увеличаването на серумните нива на пролактин, той също така повишава нивата на тестостерон (15).

Нашите резултати показват, че плъховете, издигнати на височина, увеличават плазмените стойности на пролактин (стр