Университет във Веракрус
научна статия
Jacqueline Moreno-Fitz 1, Idalia Medina-Salazar 1, Viridiana ChÃvez-HernÃЎndez 1, David ElÃas-Vià ± as 2 и Leticia Verdugo-DÃaz 1
Обобщение
Резюме
Ключови думи: болест на Паркинсон, магнитна стимулация, тирозин хидроксилаза, баланс, тест на открито поле.
1. Въведение
2.1. Плъхове
Използвани са 58 мъжки плъхове от щама Wistar с тегло 180-200 g в началото на експеримента, разпределени в групи от по 2 животни на акрилна кутия (16x37x18cm), при същите температурни условия (20-22 ° C), леки цикли: тъмнина (12:12), храна и вода при поискване. Всички животни бяха третирани в съответствие с принципите, изложени в насоките за грижа и използване на изследователски животни. 9
2.2. Експериментален дизайн
2.3. Травми и операции
Излагането на CM се извършва в продължение на два часа на ден през двата месеца на изследването на съответните подгрупи. Акрилната кутия, където животните обикновено живееха, без металния й капак, беше поставена в средата на двойката намотки по време на периодите на стимулиране (Фигура 1). Температурата вътре в кутиите беше 23.4 ± 0.4 ° C, този параметър остава постоянен по време на 2 часа стимулация.
2.5. Поведенчески тестове
2.5.1. Индуцирани от амфетамин обрати
2.5.2. Оценка на позата на кърлинг
При този тест В гризачът се задържа в последната трета на опашката и се повдига вертикално от 1 до 2 см за 1 минута. Записва се, ако се наблюдава отклонение на тялото от 10 0 В или повече към една или друга посока (вляво или вдясно), като се вземе за ориентация вертикалната ос на тялото на животното. Ако той не покаже предпочитание да наклони главата си наляво или надясно, това се оценява като нула.
2.5.3. Балансираща греда
Гризачът се поставя върху дървена пръчка с дебелина 1 см и дължина 100 см, повдигната на 80 см от пода. Преди започване на теста, гризачите трябва да бъдат обучени, като ги хванете за опашката и ги поставите за първи път на 25 см от акрилната кутия и ги призовавате да вървят по бара, докато стигнат до акрилна кутия с дървени стърготини, която те идентифицират като безопасна зона, той впоследствие тренира на разстояния от 50 см, 75 см и накрая 1 метър. Впоследствие тестът започва, като се оставя животното в края дистално от кутията и с хронометър се взема времето, необходимо за достигане до другия край и докосване на кутията. Веднъж обучен, тестът се извършва 5 пъти. Ако плъхът не завърши обиколката или не докосне кутията, тя се записва като 120 секунди (максимално време за бягане).
2.5.4. Открито поле
2.6. Хистология и имунохистохимия срещу TH
2.7. Статистически анализ
3.1. Индуцирано от амфетамин движение
3.2. Оценка на позата на кърлинг
В този тест, който има за цел да измери позата, както и тенденцията към една или друга посока по отношение на главната ос на тялото, не са открити значителни разлики между нито една от изследваните групи (данните не са показани).
3.3. Оценка на баланса
3.4. Оценка на поведението на открито
Параметрите на теста на открито (общо изминато разстояние, време на неподвижност и брой докосвания) са показани в таблици 1, 2 и 3. Общото изминато разстояние през 15-те минути на теста (Таблица 1) показва, че ранените животни са пътували по-малко разстояние от началото, отколкото непокътнати животни и фалшиво ранени животни. Във всички експериментални групи общото изминато разстояние намалява при двете оценки след стимулация (30 и 60 дни). Намалението обаче е значително само при непокътнати животни при втората оценка (F (2,15) = 6,898; p = 0,0075)
Групи (n)
базален
30 дни
60 дни
IВ В (12)
I + CMВ (6)
Фалшив (6)
Sham + CMВ (6)
LxВ (14)
Lx + CMВ (14)
Групи (n)
базален
30 дни
60 дни
IV (12)
I + CMВ (6)
Фалшив (6)
Sham + CMВ (6)
LxВ (14)
Lx + CMВ (14)
Броят пъти, в които животните са се изправяли докосвайки стените на полето с двата си предни крака, е показан в таблица 3. В този параметър, който показва информация за двигателната активност и търсенето на бягство (тревожност), са наблюдавани значителни разлики между групите. Ранените животни в базовия тест показаха най-ниските стойности в сравнение с непокътнатите и фалшиво ранените животни. На 60 дни от експеримента непокътнатите животни значително намалиха тази стойност (F (2,15) = 9,604; p = 0,0021), за разлика от ранените животни, които значително я увеличиха (F (2,36) = 4,475; p = 0,00184 ). Прилагането на CM предизвиква диференциални промени в броя на докосванията, в зависимост от експерименталната група. При непокътнати животни стимулацията предотвратява намаляването на докосванията по стените.
И накрая, животните, ранени с CM, увеличиха броя на докосванията по стените на 30 дни (не е значителна разлика), въпреки че по-късно тази стойност отново намаля след 60 дни стимулация, подобно на стойността, която те представиха в базовия тест.
ДОКОСАНИЯ ПО СТЕНИТЕ
Групи (n)
IV (12)
I + CMВ (6)
Фалшив (6)
Sham + CMВ (6)
LxВ (14)
Lx + CMВ (14)
3.5. Имунохистохимия
Фигура 4 показва представителни микрофотографии на животни от три експериментални групи (непокътнати, ранени и ранени, изложени на CM в продължение на два месеца). Доказано е, че и двете пострадали групи нямат TH имунореакция от наранената страна.
Фигура 4. Микрография на разрези на ниво стриатум с имунорерективност на тирозин хидроксилаза (TH). А) непокътната животинска секция. Б) представителна част на животно с лезия от дясната страна (липса на имунореакция) и В) секция на плъх с фалшива лезия (инжектиране на физиологичен разтвор). Черната лента на фигура А съответства на 1,5 мм.
4. Дискусия
4.1. Поведенчески ефекти
4.1.1. Индуцирани от амфетамин ротации
4.1.2. Оценка на позата
4.1.3. Баланс и движение
4.2. Разлики и прилики на животинския модел, използван в това проучване с PD при хора.
4.3. Възможни приложения при пациенти с PD
5. Заключение
6. Благодарности
Проект, финансиран от PAPIIT IN 217812. Благодарим на г-жа Antonia Rojas Terrazas за нейната голяма помощ в поддържането и грижите за животните.
7. Конфликт на интереси
Авторите декларират, че няма конфликт на интереси.