нормални

  • Обобщение
  • Главен
  • материали и методи
  • Резултати
  • Израз на PAX8 при нормални възрастни бъбреци, уретери и пикочен мехур
  • Израз на PAX8 при тумори на бъбречен епител
  • Израз на PAX8 при уротелиален карцином на бъбречното легенче, уретерите и пикочния мехур
  • Израз на PAX8 в метастатичен RCC
  • Дискусия

Обобщение

Главен

Специфичните за клетъчната линия транскрипционни фактори наскоро се появиха като ценни диагностични маркери за човешки тумори. Тези протеини се експресират в ограничени видове ембрионални тъкани и са необходими за растежа и диференциацията на тези тъкани във високоспециализирани тъкани или органи. Тъй като някои протеини продължават да се експресират в диференцирани тъкани по време на възрастен живот или в неопластични тъкани от една и съща клетъчна линия, откриването на тези протеини може да покаже първичния сайт или диференциращата черта на тумора. Добре установените диагностични маркери в тази категория включват TTF-1, 1, 2 CDX2, 3 MITF, 4 и миогенин. 5, 6

Бъбречно-клетъчният карцином (RCC) е известен със своята склонност към съдова инвазия и отдалечени метастази. Значителен брой случаи са с екстраренален растеж или метастази по време на диагнозата или след операция. 7 Поради разнообразните си хистологични характеристики, метастатичният RCC може да бъде диагностично предизвикателство и често изисква допълнителни тестове, като имунохистохимия, за потвърждение. 8 Много производители, включително цитокератини (CK), CK7, CK20, EMA, виментин, 9 c-kit, 10 P504S, 11 RCC маркер, 12, 13 аквапорин-1, 14 CD10, 15 и карбоанхидраза 9 (CAIX) 16, 17 са използвани в различни панели с променлива чувствителност и специфичност.

материали и методи

В това проучване са използвани сто четиридесет и три първични и 39 метастатични бъбречни епителни тумори. Пробите от първичен бъбречен епителен тумор идват от проби с радикална нефректомия и са конструирани в микрочипове от пет тъкани с три представителни ядра от 1 mm от всеки отделен случай. Използвани са конвенционални тъканни участъци от метастатични тумори. Четиридесет уротелиални карциноми на пикочния мехур също бяха включени в един единствен тъканен микрочип, който беше създаден по същия начин, както при първичните бъбречни епителни тумори. Нормалните контроли на тъканите включват 40 незасегнати ядра на бъбречния паренхим, съдържащи се в тъканните микрочипове, както и тъканни участъци от невключените бъбречни тазови зони (N = 5), уретери (N = 5) и пикочен мехур (N = 10).

Имунохистохимичното оцветяване с PAX8 се извършва върху самооцветяване на Dako със заешко анти-PAX8 поликлонално антитяло (1: 100) (Poteintech, Inc., Чикаго, IL, САЩ). В обобщение, вградените в парафин тъканни секции (с дебелина 5 μm) са получени от ТМА или тъканни блокове и са изпечени през нощта във фурната при 60 ° С. Секциите са последователно обезпаразитени и дехидратирани с PRO-почистващ препарат. PAR (Anatech, Battle Creek, MI, САЩ) В поредица от низходящи концентрации на алкохол и вода. Възстановяването на антигена се извършва чрез обработка на парата в продължение на 40 минути и охлаждане в продължение на 20 минути в клетъчна етикетна трилогия с разтвор на етилендиаминтетраоцетна киселина (EDTA). След възстановяване на антигена срезовете бяха инкубирани с буфериран с Tris разтвор с Tween-20 в продължение на 5 минути и след това заредени в автоматичната система за оцветяване Dako. Системата EnVision (Dako) се използва за визуализиране на първичното антитяло с хематоксилинов контраст.

Чувствителността и специфичността на PAX8 антитялото са валидирани с различни нормални тъкани и само ясно ядрено оцветяване се счита за положително за PAX8. 29 Дифузно положително оцветяване се нарича> 50% от туморните клетки, оцветяващи положително за PAX8; в противен случай оцветяването се счита за фокално положително. За метастатични CRCs, случаите с> 5% оцветяване на туморни клетки за PAX8 се считат за положителни. Интензивността на PAX8 оцветяването в туморите е оценена като слаба (1+), умерена (2+) и силна (3+).

Резултати

Експресия на PAX8 в нормален възрастен бъбрек, уретери и пикочен мехур

PAX8 оцветяване беше открито в епителните клетки на проксималните и дисталните бъбречни тубули, бримките на Henle, събирателните канали и теменните епителни клетки на капсулата на Bowman (Фигура 1а и b). Оцветяването винаги е било по-силно в дисталните тубули, париеталните клетки на капсулата на Боуман и събирателните канали (3+), отколкото в проксималните тубули (1+), при които също се наблюдава неспецифично цитоплазматично оцветяване. Силно PAX8 (3+) оцветяване беше открито във всички слоеве на лигавичните уротелиални клетки в бъбречната папила и в началната част на бъбречното легенче. В дисталните бъбречни легенчета и уретерите PAX8-положителните клетки постепенно се ограничават до междинните или базалните слоеве на уротелия с намалена интензивност на оцветяване (2+) (Фигура 1в-д). Няма оцветяване с PAX8 в уротелиума на пикочния мехур (Фигура 1е). PAX8 оцветяване не е открито в подоцити, мезангиални клетки, ендотелни клетки или в интерстициум или лимфни съдови структури на бъбреците.

Имунохистохимично оцветяване на PAX8 в нормален бъбрек при възрастни. Имунореактивен PAX8 е открит в проксималните тубули и париеталните клетки на капсулата на Bowmen ( да се, 200 ×), в клетки на дисталния бъбречен канал и примка на Henle ( б, 200 ×), в събирателния канал и бъбречните папили ( ° С, 200 ×), уротелът на бъбречното легенче ( д, 200 ×), уротелът на уретерите ( и, 200 ×), но не и в уротелиума на пикочния мехур ( F, 200 ×).

Изображение в пълен размер

Експресия на PAX8 при тумори на бъбречния епител

Таблица в пълен размер

Примери за имунохистохимично оцветяване на PAX8 в бъбречни епителни тумори. Имунореактивен PAX8 е открит в RCC на прозрачни клетки ( да се, ТОЙ; б, PAX8; 200 ×), саркоматоиден компонент (рабаид) на CCR ( ° С, ТОЙ; д, PAX8; 200 ×) и папиларен CRC ( и, ТОЙ; F, PAX8; 200 ×).

Изображение в пълен размер

В това проучване бяха включени 21 първични папиларни RCC (18 мъже, 3 жени, възрастови граници 44 до 85 години, средна възраст 70 години) и размерът на тумора варираше от 2,2 до 11,7 cm (среден размер 5,9 cm). Седемнадесет случая са тип 1 папиларен RCC в стадии I или II и съответно девет или осем пациенти. Четири случая са CRP тип 2 папиларни, които са в етап II или III. PAX8 е открит при 19/21 (90%) от папиларните RCC, включително 16 тумори от тип 1 и 3 тип 2. Оцветяването с PAX8 е дифузно и силно (3+) в 15 случая (Фигура 2д и f) (14 тумора тип 1 и 1 тип 2) и умерена (2+) в 4 случая (2 тумора тип 1 и 2 тип 2). Двата отрицателни случая на PAX8 включват един от туморите от тип 1 и един от туморите от тип 2.

В това проучване има 11 хромофобни CRC (6 мъже, 5 жени, възрастови граници 28 до 75 години, средна възраст 58 години) и размерите на тумора варират от 1 до 14 cm (среден размер на тумора 4,9 cm). Туморите са стадий I при шест пациенти, етап II при четири пациенти и етап III с метастази в лимфните възли при един пациент. Девет от 11 (82%) хромофобни CRC бяха дифузно положителни за PAX8 (Фигура 3а и b), с умерен интензитет (2+) в четири и слаб (1+) в пет случая.

Примери за имунохистохимично оцветяване на PAX8 в бъбречни епителни тумори. Имунореактивен PAX8 е открит в хромофобни RCC ( да се, ТОЙ; б, PAX8; 200 ×), при онкоцитоми ( ° С, ТОЙ; д, PAX8; 200 ×) и при медуларни бъбречни карциноми ( и, ТОЙ; F, PAX8; 200 ×).

Изображение в пълен размер

В това проучване имаше два медуларни бъбречни карцинома; единият беше 31-годишен афроамерикански мъж със сърповидно-клетъчна характеристика, а другият беше 34-годишна жена без известна история на сърповидно-клетъчна черта/анемия. Туморите бяха съответно 10 и 5 cm и бяха локализирани главно в бъбречната медула с широко участие на бъбречните корти, бъбречното легенче, уретерите и тазовите кръстовища и хиларната мека тъкан. Хистологично и двата тумора са съставени от неопластични клетки, слабо диференцирани в листове, въжета или гнезда, с висококачествени ядрени характеристики, бърза митотична активност и некроза. И двата тумора бяха дифузно положителни за PAX8 с умерена интензивност на оцветяване (2+) (Фигура 3д и f).

Изследването на първичните бъбречни тумори включва също 22 онкоцитоми (16 мъже, 6 жени, възрастови граници 43 до 80 години, средна възраст 68 години) и туморите варират от 1,5 до 10,7 cm (среден размер 4,8 cm). Двадесет и един от 22 (95%) онкоцитома бяха дифузно положителни за PAX8 със силно оцветяване (3+) (Фигура 3в и г) в 15 случая и умерено оцветяване (2+) в 6 случая. Единственият PAX8 отрицателен онкоцитом е 8 см тумор от 63-годишен мъж с незабележими хистологични характеристики.

Експресия на PAX8 при уротелиален карцином на бъбречното легенче, уретерите и пикочния мехур

Експресията на PAX8 е изследвана и при уротелиални карциноми на горните и долните пикочни пътища поради несъответствието на неговата експресия в нормалните уротелиални клетки в тези области. Случаите включват съответно 17, 2 и 40 уротелиални карциноми на бъбречното легенче, уретерите и пикочния мехур. Ядрените характеристики бяха класифицирани по система от три нива. Ядрата на 10, 6 и 1 уротелиални карциноми на бъбречното легенче бяха класифицирани съответно на 3, 2 и 1. Двата уротелиални карцинома на уретера са с ядрена степен 3. Двадесет и седем от 40-те уротелиални карциноми на пикочния мехур са класифицирани като ядрена степен 3, а останалите са с ядрена степен 2. Дифузно и умерено силно (2+) оцветяване на PAX8 е открити. при 4 (∼ 23%) от 17-те уротелиални карциноми на бъбречното легенче (Фигура 4), включително три случая с ядрена степен 2 и един случай с ядрена степен 3. PAX8 не е открит при 2-те уротелиални карциноми на уретерите или 40 уротелиални карциноми на пикочния мехур. Резултатите са обобщени и в таблица 1.

Примери за имунохистохимично оцветяване на PAX8 при уротелиални карциноми на бъбречното легенче ( да се, ТОЙ; б, PAX8; 200 ×).

Изображение в пълен размер

Експресия на PAX8 в метастатични RCC

От 39 метастатични RCC 5 са ​​в регионални лимфни възли, 6 в белия дроб, 4 в черния дроб, 7 в костите или меките тъкани, 5 в мозъка, 5 в надбъбречните жлези, 6 в панкреаса и 1 в щитовидната жлеза. От тях 32 бяха от ясен клетъчен тип, 3 бяха папиларни, 2 слабо диференцирани, 1 имаше рабдоидни черти и 1 имаше вретенен клетъчен компонент. PAX8 е открит при 33 (85%) от 39 метастатични RCC, със слабо оцветяване (1+) в 11, умерено оцветяване (2+) в 17 и силно напрежение (3+) в 5 случая. Пет от ясните клетъчни типове и туморът с рабдоидни характеристики са отрицателни за PAX8. CRC на вретеновата клетка е слабо положителен за PAX8, докато двата слабо диференцирани метастатични CRC са умерено положителни. Резултатите са обобщени в таблица 2. Няма оцветяване с PAX8 в паренхима на белия дроб, черния дроб, надбъбречните тъкани или панкреаса. Някои лимфоцити се оцветяват положително за PAX8; те обаче се различават морфологично от метастатичния карцином и няма да причинят диагностични затруднения.

Таблица в пълен размер

Дискусия

PAX2 е показан при 84-93% от ясни клетъчни CRC, 85-100% от папиларни CRC и 87% от онкоцитоми. 23, 24, 36 Тук показваме, че 98% от ясноклетъчните RCC, 90% от папиларните RCC и 95% от онкоцитомите са положителни за PAX8, честоти, които са подобни или по-добри от PAX2. PAX8 също е открит в 85% от метастатичните RCC в това проучване. Освен това PAX8 е открит при 82% от хромофобните CRC, 100% от медуларните бъбречни карциноми и 71% от саркоматоидния компонент на CRC, които обикновено са отрицателни за PAX2, аквапорин-1 и CAIX. Това предполага, че PAX8 има по-широко диагностично приложение от тези маркери. Например, откриването на PAX8 в лошо диференциран карцином на бъбреците би помогнало да се установи диагнозата на рядък и високостепенен първичен бъбречен тумор, като медуларен бъбречен или събирателен канал.