Библиометрични данни:
Citescore: 0.4 | Ранг на списание SCImago: 0,12 | Google Scholar: 0.0172

гена

Списание според стандартите "Единни изисквания за ръкописи, изпратени в биомедицински списания" www.icmje.org

Списанието се придържа към принципите и процедурите, продиктувани от "Комитета по публикационна етика (COPE)" www.publicationethics.org

Списанието се придържа към принципите на прозрачността и най-добрите практики в публикациите на DOAJ www.doaj.org

(PDF) Rev Osteoporos Metab Miner. 2017 г .; 9 (4): 114-120
DOI: http://dx.doi.org/10.4321/S1889-836X2017000400003

Ключови думи: ДНК метилиране, PTH, хронично бъбречно заболяване, паращитовидни жлези, хиперфосфатемия.

материали и методи
Експериментално проучване
За проучването са използвани 4-месечни мъжки плъхове Wistar от животновъдното заведение на Университета в Овиедо, подложени на 7/8 нефректомия (NX), състояща се от отстраняване на три четвърти от левия бъбрек и с пълна резекция на бъбреците. вдясно 14 .
Веднага след нефректомия, група уремични животни продължиха с поддържаща диета за гризачи, която има нормално съдържание (N) във фосфор (P) (0,6%; група NX-NP), докато другата група животни с нефректомирани пациенти получиха диета с високо съдържание на (Е) фосфор (0,9%; група NX-EP) в продължение на 20 седмици.
По време на жертвоприношението, извършено под СО2 анестезия и чрез обезкръвяване, серумът се събира, за да се определят общи маркери на степента на ХБН и промени в метаболизма на костите и минералите, както и паращитовидните жлези на всяка експериментална група (14 жлези от 7 плъха на група ) съхранява се при -80ºC до употреба.

Анализ на метилирането на промоторите на изследваните гени чрез бисулфитно пиросеквениране
Фенол-хлороформният метод се използва за извличане на геномния материал от паращитовидните жлези на плъхове. ДНК, извлечена от паращитовидните жлези, беше обработена с натриев бисулфит, следвайки инструкциите на EZ DNA Methylation-Gold ™ Kit D5005 комплект за бисулфитация “(Zymo Research, Orange, USA). Това беше последвано от специфична полимеразна верижна реакция (PCR), с биотинилирани праймери, последвана от пиросеквенсиращ протокол (PyroMark QUIAGEN® Q24), състоящ се от денатуриране на двойните вериги на PCR продуктите за получаване на единични вериги, една от които белязана с биотин . Биотинилираната верига се използва като шаблон за свързване на секвениращия праймер. С компютърната програма Pyromark 2.0.6, моделът на метилиране на региона на промоторите на гените PTH, VDR, CaSR и Klotho между началото на транскрипцията към 5 'края е анализиран с помощта на праймерните двойки, показани в таблица 1.

Благодаря: Тази работа е възможна благодарение на финансирането, получено от безвъзмездните средства на FEIOMM 2014 за насърчаване на транслационни изследвания. На Агустин Фернандес Фернандес от Лабораторията за епигенетика в Овиедо за предложенията му по ръкописа. Тази работа също е частично финансирана с помощта на Националния план за научноизследователска и развойна дейност 2008-2011 г., Държавен план за научноизследователска и развойна дейност + 2013-2016 г., Здравен институт Карлос III (ISCIII) - Европейски фонд за регионално развитие/00415), План за наука, технологии и иновации 2013-2017 на Княжество Астурия (GRUPIN14-028), Фондация за насърчаване на приложните научни изследвания и технологии в Астурия (FICYT), Институт за изследвания на нефрологията Reina Sofía, Fundación Renal Íñigo Алварес де Толедо, RETIC RedInRen на ISCIII - Европейски фонд за регионално развитие (RD06/0016/1013, RD12/0021/1023 и RD16/0009), от Астурийското общество Fomento Metabolic Research.

Конфликт на интереси: Авторите декларират, че не са в конфликт на интереси.

Манипулациите с опитни животни са извършени в съответствие с разпоредбите на действащите правни разпоредби (Директива на Европейския съюз 2010/63/ЕС и Кралски указ 53/2013 от 1 февруари).