Материали и методи

върху

Растителен материал. Вземане на проби от плодовете на Zizyphus jujuba (Снимка 1) Той е направен директно от дърветата, разположени във Валенсия (Испания).

Тест за привличане. Тестовете за привличане се провеждат с мухи, отглеждани в насекоми. Използваните условия на околната среда са постоянни; фотопериодът е 16: 8 (светлина: тъмно), с 26 ± 1ºC температура и 60 ± 10% относителна влажност. Възрастните на C. capitata Те се хранят със смес от автолизат на дрожди (Sigma, Мадрид) и захароза в съотношение 1: 4 (w/w). Докато ларвите се хранят със смес от пшенични трици, бирена мая, захароза, нипагин, нипазол, вода и солна киселина (20: 5: 1: 0,5: 0,5: 10: 0,1) по тегло.

Колонията на C. capitata Съхранява се в 30 * 30 * 20 см метакрилатни клетки. (Снимка 2), където мухите остават по време на своята възрастна фаза. Женските снасят яйцата през мрежа, разположена от едната страна на клетката. Яйцата попадат в тава с вода, откъдето се събират с помощта на пипета

Пастьор и се засяват на изкуствена диета, където се излюпват и развиват. Когато развитието на ларвите е на път да свърши и линеите са завършени, таблата за хранене с ларви се поставя в тава с почва, за да могат ларвите да изскочат и да се погребят, за да образуват какавидата. Тези какавиди са тези, които се събират, за да бъдат поставени в нова клетка, където възрастните, които ще формират новото поколение, ще се появят отново.

Клетките са метални 30х30х30см (Снимка 2), с 1 мм странични стени от метална мрежа, метална основа и метакрилатен капак за улесняване на достъпа за почистване. От едната му страна има отвор с втулка от плат, която позволява управлението на мухите.

Тестовете се извършват с 2-дневни и 5-дневни мухи. За да се провери привличането при млади мухи (2-дневни мухи) и възрастни мухи (5-дневни мухи), храната се изважда от клетката съответно на 1 и 4 ден.

Извършват се 3 повторения на всеки тест и контрол с вода. За това във всяка клетка се въвеждат 30 мъжки и 30 женски; общо използваме 4 клетки всеки ден, че се провежда тест за привличане.

Мухите остават за 1 час в зоната за изпитване, за да се приспособят към новите условия на околната среда и да избегнат стреса, причинен от улавянето и прехвърлянето на насекомото в зоната за изпитване.

След това във всяка клетка се поставя чашка на Петри; В клетка 1 се поставя зъбен памук или памучен фитил, напоен с вода, който ще служи като контролна за тестовете, за да се сравни съществуващото привличане към плодовете и към атрактант без аромати, но влажен. Клетки 2, 3 и 4 съдържат по едно парче зрели плодове на всяка плоча.

След като мухите влязат в контакт с плодовете, ще им бъде позволено половин час да свикнат с летливите компоненти на плодовете и оттам нататък всички клетки ще бъдат преброени на всеки 10 минути, мъжете и жените се записват. се поставят върху плодовете, както и броят на умрелите мухи.

Тест за аерация за получаване

летлив

За да се получат летливите вещества от плодовете, плодовете се поставят в отворен стъклен цилиндър, свързан в единия край с генератор на нулев въздух, а в другия край е свързан с термодесорбционна тръба с дължина 8 cm x 0,6 cm. с 200 mg Tenax TA като абсорбент.

Преди аериране се подава проба "нулев въздух" през цилиндъра с поток от 1 L/min в продължение на 5 минути, за да се проветри цилиндърът и че той не съдържа останки от анализирани предишни проби; обемът ще бъде 5 L.

След като плодовете бъдат въведени в цилиндъра, текущият поток се поддържа на 1 L/min за 3 минути. След това времето пробната тръба се поставя в края на цилиндъра и дебитът се намалява до 0,1 L/min. Времето за вземане на проби се запазва за 30 минути.

Този процес се повтаря едновременно 4 пъти, четири с целия плод и още четири с натрошените плодове.

Анализ на летливи съединения

Съединенията, адсорбирани върху епруветките на Tenax, се анализират чрез термична десорбция, съчетана с газова хроматография и масспектрометрия (TD/GC/MS).

Термичната десорбция се извършва при следните условия:

- Първична десорбция на пробата: Пробата беше подложена на температура от 300 ° С в продължение на 10 минути, преминавайки през епруветката, през това време, поток от хелий от 100 mL/min. Разделението на входа беше 1,5 ml/min, опитвайки се да бъде възможно най-ниско

за да се избегне загуба на проба.

- Взетата проба от епруветката се провежда в a "студен капан" кварц, напълнен с Tenax TA ®, който остава по време на първична десорбция при температура от? 30ºC.

- След като първичната десорбция приключи, започва вторична десорбция. Вторичната десорбция се състои в десорбиране на "студен капан", която е подложена на силно нагряване, така че за няколко секунди преминава от? 30ºC на 300ºC, с хелиев поток от 21 ml/min (потокът на вторичната десорбция се определя от разделянето на изхода плюс потока на колоната, които са предварително зададени при 20 и 1 mL/min съответно). Изходното разделяне е предварително зададено на 20 ml/min, тъй като

В предварителните тестове беше показано, че е минималният поток, необходим за извличане на този вид вещества от капана. След като завърши вторичната десорбция, пробата автоматично се въвежда в газовия хроматограф през трансферната линия, която остава при температура 250 ° C.

Условията на хроматографа са: Колона (ZB 5, 30m x 0,25 mm) и температурна програма: 40ºC/3 min/3ºC min-1/60ºC/0 min/6ºC min-1/160ºC/0 min/12ºC min-1/260ºC/5 минути).

Детекторът на маса е електронен детектор за удар, програмиран да направи Пълно сканиране между 35 и 300 AMU, по време на получаването на хроматограмата, което в този случай е 40 минути, така че обработва всички вещества, които влизат в детектора в това време.

Статистическо третиране на резултатите

Изследването е направено с нормализирани стойности и с логаритмични стойности. Това е така, защото данните за привличането обикновено не се разпределят; Наблюдавайки разпределението на данните върху нормална вероятностна хартия, се вижда, че разпределението на данните е логаритмично, с което се прилага преобразуването X = lg (x + 1), където X е променливата на привличане. С X се получава нормално разпределение и след това може да се приложи ANOVA. ANOVA ни дава статистиката, а No ANOVA - средствата и стандартната грешка.

Резултати и дискусия

Тестове за привличане

Резултатите от тестовете за привличане са изследвани статистически, като се използват нормализирани стойности и логаритмични стойности, тъй като данните за привличането обикновено не се разпределят, а следват логаритмично разпределение. Забелязва се (Фигура 1), че както при младите, така и при възрастните жени, привличането е много значително, с много високи нива. В случай на зрели жени (Df = 1/82, F = 49,92, P = 0,0000) нивата на привличане на двата атрактанта са малко по-високи, отколкото при младите жени (Df = 1/82, F = 30,16, P = 0,0000), но разликата в привличането между двете е еднаква в двете проучвания. Разликата в привличането на мъжете на пет дни (Df = 1/82, F = 11.59, P = 0.0010) е по-голяма от тази на двудневните мъже (Df = 1/82, F = 5.88, P = 0,0175), но и в двата случая няма атракция, с която да се каже, че съединенията на хинап са важни за мъжете (Фигура 2).

При изследването на общия брой привлечени мухи (Фигура 3) виждаме, че има разлики в привличането в зависимост от възрастта. В случай на по-стари мухи (Df = 1/82, F = 76,27, P = 0,0000) има малко по-голяма разлика, отколкото при младите мухи (Df = 1/82, F = 25,74, P = 0,0000).

По този начин привличането на плодовете (хинап) е по-голямо при по-възрастните мухи, освен че е много по-високо при жените, отколкото при мъжете (Таблица 1).

Ако сравним стойностите на привличане с възрастта на мухите, се забелязва, че при зрелите мухи има по-голямо привличане, отколкото при младите мухи. Това е така, защото петдневните мухи са полово зрели и са по-привлечени от плодови съединения, отколкото мухи, които все още не са достигнали полова зрялост (Фигура 4). В зависимост от пола има голяма разлика между нивата на привличане на жени и мъже, като жените са най-привлечени. Мъжете обаче не представляват значителни атракции (Таблица 2).

Идентифициране на летливи съединения

хинап

Летливите съединения се получават чрез въвеждане на парченцата плодове, цели или разцепени, в стъклени тръби, които са прикрепени към разходомерите от едната страна и към тръбите, пълни с Tenax TA, от другата, където летливите вещества се събират и обработват. газово-масов хроматограф. Идентификацията се извършва чрез сравняване на масовите спектри на продуктите с виртуалната библиотека NIST MASS Spectral Database и проверка със стандарти. Идентифицирани са 14 съединения (Таблица 3).

В изследваните плодове, разделени и цели, открихме наличието на съединения с призната привлекателна сила за Цератит capitata (H ERNÁNDEZ -S ÁNCHEZ, G и др. 2001).

Привличането на хинапа може да се дължи, наред с други фактори, на летливите съединения, излъчвани от плодовете, както и на концентрацията, в която се намират тези летливи вещества. Въпреки че е вярно, че са идентифицирани 14 съединения, е необходимо да се има предвид съществуването на други, които не са идентифицирани в тази работа и които също могат да имат привлекателна активност. Има и други фактори като цвета на плодовете, температурата и относителната влажност, чието влияние върху привличането е известно. В това проучване променливостта на температурата и влажността не влияят на факторите, тъй като тестовете са проведени по едно и също време на годината и с много сходни условия на околната среда.

Заключения

В тази работа е проверено, че хинапът ( Ziziphus jujuba ) представя атрактивна дейност на Ceratitis capitata.

Женските на Ceratitis capitata те са по-привлечени от мъжете. Привличането, оказано от плодовете, е по-голямо при по-възрастните мухи, т.е. когато плодовата муха е в зряла фаза, отколкото в младата си фаза, но привличането не зависи само от пола или периода на зрялост Ceratitis capitata, но също така и на факторите на околната среда и главно на летливите съединения, съдържащи се в плодовете, и тяхната зрялост, тъй като това определя, наред с други неща, техния състав в летливите.

Наличието на летливи съединения с призната привлекателна активност е установено в хинапа, което оправдава привличането на мухата към този плод.

Сред летливите вещества, открити в различните плодове, трябва да се отбележи наличието на 2,4-диметилхептан, (Е) -2-хексен-1-ол и 1-хексанол. Тези съединения могат да бъдат главно отговорни за привличането, което представлява. Формулирането на тези съединения в подходящи носители ще позволи тяхното изследване в лабораторията и последваща употреба на полето.

Получените резултати ни канят да напреднем в тази линия на изследване предвид бъдещата приложимост на резултатите от тези работи при разработването на нови, по-ефективни и устойчиви стратегии за контрол на вредителите. Повечето от тях за предпочитане се основават на получаване на по-ефективни атрактанти.