Модификации на серумни липиди на плъхове, допълнени с мед по орален път

липиди

Оскар М. Аларкон-Коредор, Елизабет Карневали де Тата, Хосе Рейноса-Фюлер, Ярица Контрерас, Мария Рамирес де Фернандес и Клаудия Янез-Домингес

Медицински факултет и Фармацевтичен факултет, Universidad de Los Andes. Мерида, Венецуела

Ключови думи: мед, липиден метаболизъм, серумен холестерол, триглицериди, неестерифицирани мастни киселини, чернодробно желязо, чернодробен цинк.

Kew words: Correr, липиден метаболизъм, серумен холестерол, триглицериди, фосфолипиди, неестерифицирани мастни киселини, чернодробно желязо, чернодробен цинк.

Получено: 10-16-1999 г. Прието: 07-26-2000

Медта (Cu) като неразделна част от множество купроензими и купропротеини се счита за основен микроелемент в различни физиологични и метаболитни процеси, които компрометират, наред с другото, развитието и поддържането на сърдечно-съдовата и костната цялост, структурата и функцията на централната нервна система и еритропоетична функция, заедно с метаболизма на желязото (1).

Биохимичното значение на медта е известно от хранителни изследвания, проведени през 1928 г. Въпреки това, въпреки някои констатации през 30-те години, неговият дефицит при хората се счита за практически интерес само въз основа на проучвания, проведени от Cordano et al. (2), при бебета и недохранени перуански деца. Дефицитът на мед не се е смятал за проблем в миналото поради широкото му разпространение в хранителните линии, които стават част от повечето диети по целия свят. От друга страна, вашите прогнозни дневни нужди са много ниски. Понастоящем обаче се счита, че при хората дефицитът на мед може да възникне и да се случи (3). Въпреки това важността и интензивността на проблема, както и естеството и честотата на умерените недостатъци е нещо, което трябва да бъде изяснено.

Дефицитът на мед е фундаментално патология на кърмачетата; обаче са описани случаи и при деца и възрастни. Това може да е резултат от неадекватен прием на храна, процес на малабсорбция, повишени изисквания или увеличаване на телесните загуби (4). Най-постоянните му клинични прояви са анемия, неутропения и костни лезии (5).

При експериментални животни и при хора дефицитът на мед определя нарушенията на липидния метаболизъм, а хиперлипидемията е придружена от промени в липопротеиновия профил (6-9). При плъховете хиперхолестеролемията се превърна в класически симптом на хранителния дефицит на този основен микроелемент (10).

Повишаване на серумната концентрация на общия холестерол и холестерол: LDL и намалена концентрация на холестерол: HDL са наблюдавани при лица, хранени с експериментална диета за понижаване на медта (11,12). Всички тези промени са много добре известни рискови фактори за развитието на атеросклероза (13,14). Други експерименти обаче не са възпроизвели тези промени в метаболизма на холестерола и глюкозата (15).

Работите на Wiliams et al. (16) показват, че дефицитът на мед е свързан със спонтанно задържане на чернодробно желязо. Наскоро беше изтъкнато при плъхове, че хиперхолестеролемията и хипертриглицеридемията са свързани с повишени концентрации на чернодробно желязо (17), което показва пряка връзка между величината на липидите в кръвта и концентрацията на чернодробно желязо. Въз основа на тези данни се предполага, че желязото е отговорно за развитието на липемия при недостиг на мед. Неотдавнашната работа на Fields and Lewis (18) предполага, че хранителните вещества, които имат способността да повишават чернодробното желязо, имат потенциал да увеличат плазмения холестерол.

Въз основа на тези предишни констатации, причината за настоящото разследване беше да се проучи ефектът от увеличаване на дозите мед (10, 20 и 50 ppp Cu/kg диета) през устата върху съдържанието на желязо и цинк в черния дроб и върху серумното съдържание на общо липиди, общ холестерол, триглицериди, фосфолипиди и неестерифицирани мастни киселини (AGNE) при бели мъжки плъхове (експериментални групи) и сравнете с това, което се случва при плъхове, хранени с балансирана диета, съдържаща съответно 0,6 и 6 ppm Cu/kg (контролни групи).

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

Животни и диета

За съответните адаптации бяха използвани 100 мъжки бели плъхове Wistar, с еднаква възраст и тегло (160-170 g), държани в отделни клетки от неръждаема стомана в лабораторна среда в продължение на две седмици. Температурата и влажността в помещението се контролират съответно при 23-25 ​​° C и 55-67%. Всички плъхове са хранени с основна диета, съгласно препоръките на Американския институт по хранене (19), формулирана в нашата лаборатория, за да се пропусне меден карбонат. Диетата, която не съдържа холестерол, се състои от смес от захароза (62 тегловни%), яйчен белтък (20%) и царевично масло (10%) с дефицит на мед (0,6 ppm). В допълнение, диетата съдържа всички хранителни вещества, считани за основни за плъховете, включително 2 mg биотин; съдържанието на мед в същото се определя след разрушаването на органичното вещество. Плъховете се хранят ad libitum и им се позволява свободен достъп до двойно дестилирана и дейонизирана вода. Концентрацията на Cu в дейонизираната вода е под границите на откриване на елемента (0,002 μg/mL) от използвания атомно-абсорбционен спектрофотометър.

В края на адаптационния период плъховете със средно тегло 182 ± 9 g бяха разпределени на случаен принцип в 5 групи, с по 20 животни във всяка, без значителни разлики между средните стойности на теглото им: 1) група с недостиг на мед (CuD) захранван ad libitum с 0.6 ppm Cu; 2) контролна група, хранена ad libitum с 6 ppm Cu/kg диета (CuA); 3) група, хранена едновременно, на която е доставена основната диета, допълнена с 10 ppm Cu (Cu10); 4) група, хранена по едно и също време, на която основната диета е допълнена с 20 ppm Cu (Cu20) и 5) група, хранена едновременно, на която е доставена основната диета, допълнена с 50 ppm Cu. ( Cu50) (Експериментални групи). Плъховете в тези групи се хранят ежедневно със същото количество храна, консумирана от контролните плъхове (CuA). Меден карбонат (Merck) се добавя към основната диета (0,6 ppm), за да се осигурят концентрации от 6, 10, 20 и 50 ppm/kg диета.

Събиране на проби

В началото на експериментите, след период на гладно от 8 часа, кръвните проби (3 ml) се екстрахират през ретроорбиталния синус под анестезия с диетилов етер (Merck) и микрохематокритни епруветки. 1,5 ml кръв се събират в стъклени епруветки без антикоагулант, серумът се отделя чрез центрофугиране при 1000 g в продължение на 15 минути при стайна температура и се анализира преди 48 часа. Останалата кръв (1,5 ml) се събира в епруветки, съдържащи хепарин и плазмата се отделя чрез центрофугиране.

В края на 6-седмичния период, след като кръвните проби бяха получени, животните бяха умъртвени и черният дроб беше бързо отстранен, мазнините и съединителната тъкан бяха отстранени и претеглени. Мед от диета и черен дроб и цинк и желязо от чернодробна тъкан са извлечени от пробите съгласно метода, описан от Burguera et al. (двадесет). Дублирани проби бяха анализирани с помощта на атомно-абсорбционен спектрофотометър, оборудван с двулъчев коректор на шума и микропроцесор. Серумните концентрации на холестерол и ацилтриглицероли (триглицериди) се определят чрез ензимни методи, описани по-рано (21, 22), докато общите липиди се определят по метода на Aiquel (23). Фосфолипидите са оценени съгласно метода на OBrien et al. (24) и плазмените нива на неестерифицирани мастни киселини (AGNE) с техниката, описана от Ióvine et al. (25).

Данните бяха статистически анализирани с помощта на линеен регресионен анализ и еднопосочен ANOVA. Тестът на Дънкан за многократен обхват беше използван за сравняване на средните стойности на 5-те групи (CuD, CuA, Cu10, Cu20 и Cu50). За анализ на данните беше използван статистическият пакет Statgrafic 2.0 за Win. Всички данни са изразени като SD. Значителната разлика между групите в началото и в края на експеримента се изчислява чрез t тест на Student. Нивото на статистическа значимост е определено на p

Резултатите от сравняването на серумните липидни стойности в началото (0 дни) и в края (6 седмици) на експерименталния период са показани в таблици 1 до 5. Таблица 1 показва общите серумни липидни нива на плъхове, допълнени с различни концентрации на мед. Забелязва се, че при плъхове, допълнени с Cu, липемията е значително увеличена (р 0,05), тя демонстрира статистически значими разлики при сравняване на средните стойности на липемия на различните групи животни в края на експерименталния период.

Резултатите, получени от модела на простата регресия (y = a + b * X, където X = доза мед), за да опишат връзката между стойностите на липемия в края на експеримента (6 седмици) и дозите мед доставени с диетата са посочени по-долу: y = 245,5555 + 1,31899 * доза); r = 0,954 и R2 - = 90,94%. Стойността на статистиката за R2 показва, че моделът, коригиран, обяснява 90,94% от променливостта на стойностите на липемия след 6 седмично лечение. Коефициентът на корелация (r), равен на 0,954, показва, че има относително силна и пряко пропорционална връзка между променливите; тоест повишаването на общите серумни нива на липидите на 6 седмици от лечението е пряко пропорционално на дозите мед.

Общи серумни липидни нива на плъхове, допълнени с различни концентрации на мед