За диагностициране Синдром на Даун В пренаталния период има два вида тестове:

  1. Скринингови тестове или предполагаеми, неинвазивни, които изчисляват риска, но не диагностицират, че плодът има синдром на Даун. Липсва им риск от аборт.
  2. Диагностични тестове, инвазивен, с известен риск от спонтанен аборт (0,5-1%).

I. Скринингови тестове (неинвазивни)

Обикновено първо се извършва скрининг, чрез който се определя презумпцията или подозрението за риск. Този скрининг няма риск от спонтанен аборт, но не е диагноза. Тестовете за презумпция или съмнение се състоят от своя страна от три вида тестове:

  1. Тестът, извършен с техниката ДНК без клетки [cfDNA]) в майчината кръв.
  2. The биохимичен анализ на набор от вещества (протеини, хормони, фетална ДНК), открити в майчината кръв. Концентрацията на тези вещества варира, ако плодът има определени хромозомни проблеми (например тризомия 21) или развитие. Вариацията на тази концентрация също зависи от периода на бременността, в който се извършва анализ (гестационна възраст).
  3. The ултразвуков анализили ултразвук на плода, който открива изображения, които показват, че той може да има синдром на Даун. Стойността му се основава на потвърден опит, че някои откриваеми с ултразвук изображения често са показателни за аномалии в развитието или хромозомите. В момента използването на тази техника е страхотно, въпреки че е необходимо сонографът да има солиден опит. Наличието на тези изображения е свързано с гестационната възраст на майката и в тяхната прогностична стойност трябва да се вземе предвид и възрастта на майката.

Нито един от предполагаемите тестове няма окончателна диагностична стойност. Изчисляването на неговата вероятностна стойност изисква статистически операции, които отчитат както гестационната възраст, така и хронологичната възраст на майката. Те имат процент на фалшиви положителни резултати, т.е. данните, считани за положителни (плодът изглежда има синдром на Даун), не се потвърждават по-късно от диагноза кариотип.

Предполагаем тест ще бъде колкото по-надежден и ценен, толкова по-добре е показал, че вероятността му плодът да има синдром на Даун е потвърдена по-късно и колкото по-малко фалшиви положителни резултати предлага. Но въпреки това окончателното потвърждение винаги изисква анализ на кариотипа.

Защо тогава се извършват предполагаеми тестове? Тъй като са по-лесни за изпълнение, те са безобидни, предлагат незабавни данни и позволяват да се запази изпълнението на инвазивни, по-рискови тестове, само за случаи, които са наистина подозрителни.

а) Неинвазивен пренатален тест (свободна фетална ДНК в майчината кръв)

Този анализ се основава на факта, че има малка част от феталната ДНК в кръвта на майката, която може да бъде открита и анализирана. След усилване на тази ДНК и измерване на относителното количество ДНК на всяка хромозома, може да се изчисли дали има промяна в броя на хромозоми на плода, като по този начин предлага оценка на риска за плода, който има някоя от най-често срещаните анеуплоидии: тризомия 21 (синдром на Даун), тризомия 18, тризомия 13, анеуплоидии на половите хромозоми. (Анеуплоидията означава, че броят на хромозомите в клетките не е 46, а по-голям или по-малък чрез дублиране или делеция на хромозома, съответно). Резултатите, получени от анализа на свободната фетална ДНК в майчината плазма, са много точни, но не са окончателни. Следователно, въпреки високата си специфичност и чувствителност, необходимостта от потвърждаване на положителни резултати за хромозомни промени чрез инвазивни тестове остава. Какво скринингов тест на анеуплоидиите не се финансира в Испания от публичната система.

б) Тестове, които могат да се извършват през първия триместър на бременността:

Измерване на a кожна гънка върху шийката на плоданухална полупрозрачност) чрез ултразвук. Гестационната възраст е важна. Възрастта, която предлага най-надеждни данни, е между 11-та и 13-та седмица от бременността.

Биохимичен анализ на следните продукти - наречени маркери - в кръвта на майката (серумен анализ):

- Свързан с бременността кръвен плазмен протеин А (PAPP-A)
- Безплатната бета субединица на човешки хорион гонадотропин (fβhCG)

в) Тестове, които могат да се извършват през втория триместър на бременността:

Биохимичен анализ на следните маркери в кръвта на майката (серумен анализ):

- Алфа-фетопротеин
- Общ човешки хорион гонадотропин
- Неконюгиран естриол
- Инхибин А

Анализът на първите три продукта се нарича „троен тест“; анализът на четиримата се нарича „четворен тест“.

Ултразвуково изследване на различни признаци, което вече не е нухална полупрозрачност. Например: кост на носа, малформации на органи (сърце, храносмилателен тракт), чернодробни калцификации, размер на дълги кости и др.

II. Диагностични тестове (инвазивни)

Целта му е да се получат фетални клетки, в които може да се установи наличието на тризомия на хромозома 21, било то цялостно, било частично (транслокация).

Основните критерии, които правят пренатална диагностика инвазивни са:

  1. майката е на възраст над 35 години
  2. предполагаемите тестове връщат положителна стойност (по-голяма от 1/250 или 1/270)
  3. има пряка история на генетична патология
  4. съществува риск от ултразвукова аномалия

Получаването на клетките се извършва, като се използват следните техники:

1. Амниоцентеза

диагностични
Чрез амниоцентезата, чието използване стана широко разпространено през 70-те години на миналия век, специалистите са в състояние да диагностицират повечето плодове с хромозомни аномалии, включително Синдром на Даун. Тази техника обикновено се извършва в седмици от 14 до 17 от бременността, въпреки че може да се извърши и преди или след тази дата. Преди да се извърши, плацентата и амниотичната кухина се идентифицират и локализират с помощта на ултразвук и се прилага местна упойка. След това и под директен ултразвуков контрол се вкарва игла в корема през коремната стена. (Фиг. 1) и околоплодната течност, която се оттича през иглата, се аспирира. Впоследствие тази течност се центрофугира и получените фетални клетки се оставят да растат в култура, за да се извърши по-късно хромозомния анализ. Амниоцентезата крие някои рискове, присъщи на техниката, като аборт, нараняване на плода или инфекция при майката.Фигура 1. Амниоцентеза - начин за отстраняване на околоплодната течност

Това обаче е процедура, която обикновено е относително безобидна.

След като клетките се получат, те се анализират, за да се види дали има трета хромозома 21. За това могат да се следват три метода:

  • Кариотипът: изисква да се държат клетките изолирани в културата и да се анализира и преброи броят на хромозомите, които те съдържат. Отнема 2-3 седмици, за да се получи резултатът.
  • Флуоресценция In Situ хибридизация (FISH): позволява бързо идентифициране на хромозомни аномалии в клетките. Използвайки тази техника, ДНК се маркира с флуоресцентни молекули, които се свързват със специфична област, разположена на хромозомата, която ще се изследва, и след оцветяването се визуализира чрез флуоресцентна микроскопия. Със специфични за хромозоми сонди специалист може бързо да определи наличието на допълнителна хромозома 21; ще видите три флуоресцентни сигнала вместо нормалните два (по един за всяка хромозома 21), което показва, че плодът има синдром на Даун (фиг. 2).

Фигура 2. Флуоресцентна in situ хибридизация (FISH) на случай на частична тризомия на хромозома 21, при която има транслокация 15; 21. (Снимка, направена с разрешение от: Nadal et al., J. Med. Genet. 1997; 34: 50-54).

  • QF-PCR: Клетъчните проби се получават по подобен начин на описаните (амниоцентеза, хорионни ворсинки), но QF-PCR показва следните предимства:

- Не изисква клетъчна култура
- Поставете диагнозата на анеуплоидии и други важни хромозомни аномалии за 24-48 часа
- Има висока чувствителност
- Показва висока специфичност
- Автоматизиран, той позволява да се анализират едновременно голям брой проби, намалявайки разходите

Техниката PCR е способна бързо да умножи части от ДНК на хромозомите (например 21), когато тези части са били предварително избрани и, така да се каже, фиксирани или задържани от елементи, наречени праймери. Това размножаване на веригата се постига чрез действието на ензим, наречен полимераза, чиято функция е да насърчава пролиферацията на ДНК (оттук и името: полимеразна верижна реакция). Окончателното количество на тази част от ДНК, избрана преди това, благодарение на процеса на умножаване, ще бъде пропорционално на първоначалното количество ДНК, което съществува. Тоест, ако феталните клетки имат 3 хромозоми 21 вместо 2 (тризомия 21), крайното количество ДНК от хромозома 21 ще бъде по-голямо, отколкото ако имаше само 2 хромозоми 21. Количественото определяне на ДНК се постига с помощта на техниката на флуоресценция (количествена флуоресценция). Следователно, цялата техника се нарича QF-PCR.

2. Биопсия на хорионни ворсинки

Тестът се състои в получаване на парче плацентарна тъкан вагинално или през корема, обикновено между 8-ма и 11-та гестационна седмица. (фиг. 3).

Фигура 3. Как да вземете проба от хорионни вилуси

След това клетките, получени от плацентарната тъкан, се използват за хромозомен анализ. Предимствата на тази процедура пред амниоцентезата са двойни: тя може да се извърши много по-рано по време на бременността и хромозомното изследване се извършва незабавно, като резултатите се получават по-бързо. Досега проучванията показват, че рискът е незначителен, но не значително по-голям от този на амниоцентезата.

3. Кордоцентеза

Това е изключителен метод, който се състои в пробиване на пъпната връв през стената на майчината утроба, за да се получи директна фетална кръв. Рискът от загуба на плода е по-висок от предишните методи (3%).