Int. J. Morphol., 30 (2): 432-438, 2012.

Сравнително проучване между консервативни разтвори със и без Формол в човешка плацента

Сравнително проучване между консервативни разтвори със и без формалдехид в човешка плацента

* Даниел Волф; * Пабло Вила; * Alejandra Neirreitter; * Сесилия Руйбал; * Густаво Арманд Угон; ** Гилермо Салгадо & ***, **** Марио Кантин

* Катедра по анатомия, Медицински факултет, Университет на Републиката, Монтевидео, Уругвай.

** Катедра по нормална анатомия, Медицински факултет, Pontificia Universidad Católica de Chile, Сантяго, Чили.

*** Катедра по комплексна стоматология, Факултет по дентална медицина, Университет де Ла Фронтера, Темуко, Чили.

**** Докторат по морфологични науки, Медицински факултет, Университет де Ла Фронтера, Темуко, Чили.

КЛЮЧОВИ ДУМИ: Плацента; Анатомични техники; Фиксиращ разтвор; Формол; Без формалин.

КЛЮЧОВИ ДУМИ: плацента; Анатомични техники; Фиксиращ разтвор; Формалдехид; Без формалдехид.

ВЪВЕДЕНИЕ

Техниките за анатомично фиксиране и запазване имат за цел да направят тъканите стабилни и да ги предпазят от влошаване. Тези техники са от основно значение за изучаване на човешката и ветеринарната анатомия, използвани за лечение на различни органи и вътрешни органи с образователна, академична и изследователска цел. Ето защо през историята са търсени вещества, които поддържат, доколкото е възможно, естественото състояние на тялото или органите (Busdamente et al., 2007).

Rivera et al. са декларирали, че методите за консервиране на базата на формалдехид, използвани в областта на анатомията на много университети, не са най-подходящите, тъй като те представляват недостатъци за третираните парчета като по-голяма твърдост, прибиране на обема на органите и загуба на естественият цвят (Hildebrand).

Като алтернативна техника на фиксиране и консервиране на структури е разработен методът на Prives, създаден в лабораторията по анатомия на Първия ленинградски медицински институт, който се основава на принципа, че силно хигроскопично вещество като глицерин улавя постоянно вода от атмосферата, която заобикаля парчето, така че то не губи тегло, запазва обема си и приема мека консистенция, калиев ацетат, който служи като консервант и регулатор на киселинността, докато тимолът се характеризира със своята дезинфекцираща сила и фунгицид (Correa, 2005).

Макроскопското изследване на човешката плацента е от голямо значение за преподаването и анатомичните изследвания и подготовката на проби за хистологични изследвания (Bustamante et al.), Както и за нейното клинично изследване, особено когато има усложнения по време на бременност, раждане или раждане. В последните случаи плацентите рутинно се фиксират чрез потапяне в неутрални 3.7% или 4.0% образувани разтвори (Fox et al., 1999).

Според описания фон е желателно да се използват разтвори без формалдехид за фиксиране и запазване на анатомични структури. Целта на тази работа беше да се сравнят два метода за анатомично консервиране, единият с формалдехид (разтвор на Монтевидео), а другият без формалдехид (метод на Привс), използвайки човешката плацента като експериментален орган, оценявайки макроскопските параметри.

Материал и метод

Използвани са 46 единични човешки плаценти от нормални раждания и доносена бременност, със средно тегло над 400 g, получени от Службата по майчинство на болница Pereira Rossell в Монтевидео, Уругвай. Плацентите незабавно се подлагат на съдова промивка чрез канюлиране и фиксиране на канюлите по венозен път и измиването се извършва с вода при постоянно налягане, докато съдовете се почистят напълно.

Плацентите бяха разделени на две групи. Първата група плаценти (n = 22) беше перфузирана с контролирано налягане по венозен път с разтвор на Монтевидео, който съдържа: вода (70%), формалдехид (15%), метилов алкохол (5%), етилов алкохол (5%), глицерин (2,5%), фенинова киселина (1%) и калиев нитрат (1,5%). Втората група плаценти (n = 24) бяха перфузирани с разтвора на метода на Prives, съдържащ глицерин (45%), калиев ацетат (10%), вода (40%) и тимол (5%). И двете вливания се извършват ръчно.

След това всяка група плаценти се потапя в съответния им консервационен разтвор за 2 седмици в затворен съд при стайна температура. Количеството на разтвора се определя от обема на парчето (плацентите), така че те да са напълно потопени в разтвора, като се поставя тежест върху тях, за да се предотврати тяхното плаване. След изтичане на времето те се отстраняват от разтвора и се оставят на въздух при стайна температура за още 2 седмици.

Количествените променливи на теглото и диаметъра на плацентата бяха анализирани във всяко от парчетата, както и качествените променливи на консистенция, цвят, мирис и растеж на микро и макроорганизми. Консистенцията беше оценена по отношение на 1) нормална или прясна; 2) еластична или леко твърда; и 3) твърди или каучукови. Цветът беше класифициран като 1) естествен, 2) тъмно червен, 3) кафяв и 4) тъмно кафяв. Миризмата беше класифицирана като 1) без мирис; 2) лека миризма; 3) лека миризма и 4) дразнеща миризма. По отношение на растежа на макро и микроорганизми, се наблюдава наличие или отсъствие на макроколонии в някои от плацентарните повърхности.

Събирането на данни се извършва преди измиване, на 14, 21 и 28 дни. Получените данни са въведени от оператор в шаблон на Excel. Описателни статистически анализи бяха извършени с помощта на Graphad 4.0 Software.

Резултати

Преди измиване и фиксиране групата на плацентите, които трябва да бъдат третирани с разтвор на формалдехид, имаше средно тегло 567,72 g, с диаметър по-голям от 20,27 ± 1,508 cm (Среден, SD) (диапазон между 18 и 23 cm), докато най-малкият диаметър наблюдаваното е 18,57 ± 1,561 (диапазони от 15 и 21 cm). Плацентите, които трябва да бъдат третирани с разтвор без формалдехид, са имали средно тегло 641,35 g, с по-голям диаметър 20,46 ± 1,911 cm (диапазон между 18 и 26 cm), докато по-малкият диаметър е бил 18,63 ± 1,657 cm (диапазон между 16,5 и 22 cm ) (Таблица I).

На 14-ти ден плацентите, третирани с разтвор на формалдехид, са показали средно тегло 465,56, с по-голям диаметър 19,84 ± 1,451 cm (диапазон между 17 и 22 cm), докато най-малкият диаметър е бил 18,30 ± 1,777 cm (диапазон между 14 и 21 cm) . Плацентите, третирани с разтвор без формалдехид, са със средно тегло 530.02g, с по-голям диаметър 19.83 ± 1.761cm (диапазон между 17 и 24.5cm), докато по-малкият диаметър е 18.21 ± 1.641 (диапазон между 16 и 22.5 cm) ( Таблица I).

На 21 ден плацентите, третирани с разтвор на формалдехид, са показали средно тегло 467,56, с диаметър по-голям от 18,95 ± 1,558 cm (диапазон между 16 и 21 cm), докато най-малкият диаметър е бил 17,66 ± 1,606 cm (диапазон между 14,5 и 20 cm) . Плацентите, третирани с разтвор без формалдехид, са имали средно тегло 532,40 g, с по-голям диаметър 19,10 ± 1,452 cm (диапазон между 16 и 22,5 cm), докато по-малкият диаметър е бил 17,38 ± 1,641. (Диапазон между 15 и 21 cm) (Таблица I).

И накрая, на 28 ден, плацентите, третирани с разтвор на формалдехид, са показали средно тегло 467,40, с диаметър по-голям от 18,30 ± 1,477 cm (диапазон между 15 и 20,5 cm), докато най-малкият диаметър е бил 17, 02 ± 1,547 cm (диапазон между 13,5 и 19,5 см). Плацентите, третирани с разтвор без формалдехид, са имали средно тегло 532,10 g, с по-голям диаметър 18,9 ± 1,391 cm (диапазон между 16 и 22,0 cm), докато при най-малкия диаметър е бил 17,23 ± 1,399 (диапазон между 15,5 и 20,5 cm ) (Таблица I).

Във връзка с консистенцията на третираните плаценти, в групата с формалдехид на 14-ия ден те показаха еластична консистенция, ставайки твърда към 21-ия ден, характеристика, която остана до 28-ия ден, докато в групата без формалдехидни промени се наблюдават в на 21-ва към еластична консистенция. В нито един от случаите не се виждаха плаценти с твърда консистенция в сравнение с групата, третирана с формалдехид. Що се отнася до цвета им, плацентите, третирани с формалдехид, показват значителни промени в нюанса, когато се наблюдават между 14 и 28 ден, показвайки съответно кафяв и тъмнокафяв цвят. В групата без формалдехид се наблюдава само лека промяна в обезцветяването към ден 28 с тъмночервен цвят (Таблица II).

При оценка на миризмата на пробите, плацентите, третирани с формалдехид, имаха дразнеща миризма на 14 и 21 ден, намалявайки до умерена миризма по отношение на дразненето към 28 ден, докато в третирани без формалдехид проби те не показаха никаква миризма дразнител до ден 28 от оценката. В никоя от групите не се наблюдава наличие на колонии от микро/макроорганизми върху никоя от плацентарните повърхности (Таблица II).

сравнително

ДИСКУСИЯ

Методът за консервиране без използван формалдехид или методът на Prives показа по-добри консервационни свойства във всички макроскопични характеристики, оценени в нашето изследване върху човешки плаценти, в сравнение с класически разтвор на базата на формалдехид, вещество, с което всеки здравен специалист е имал ранен контакт в дните му на постоянство в лабораториите за нормална или патологична анатомия на човека (lmbus, 1985).

Използването на алтернативни фиксиращи разтвори е интересна тема за разработка на техниките за опазване и подготовка на дидактически материал в областта на анатомията, както и други дисциплини, главно поради научните доказателства за неговия канцерогенен потенциал, така че избягването на използването му е най-доброто защита.

Плацентата е утвърдена като отличен източник на тъкан за хромозомен анализ. Cowles et al. (1995) описват използването на флуоресцентна in situ хибридизация (FISH) върху плацентарната тъкан, за да се получи информация за хромозомни аномалии, където 75 процента от кариотипите, наблюдавани в плацентата, включващи анеуплоиди, триплоиди и нормали, са адекватно идентифицирани. Тази информация се получава главно от фиксирани с формалдехид плаценти, тъй като прясната тъкан обикновено не е достъпна за стандартен анализ на кариотипа. Halder & Park (1999) оценява пригодността на фиксирането на формалин в различни тъкани чрез FISH, като получава ефективност от 14, 5 и 0% за запазените плаценти съответно за еднократната, двойната или тройната цветна FISH. Тези резултати показват ниска степен на откриване на хромозомна плоидия в фиксирана с формалдехид плацентарна тъкан.

От друга страна е важно да се спомене, че всеки метод, използван за опазване на плацентите, трябва да се извършва своевременно. Jauniaux et al. (1991) посочват, че най-добрите резултати от консервацията се получават при перфузия непосредствено след раждането, с налягане, поддържано под 60 mm Hg, където електронната микроскопия демонстрира добро запазване на клетъчната ултраструктура. Въпреки това, в случаите, когато непосредственото му изпълнение е трудно, перфузионната фиксация може да се извърши до 6 часа след раждането със задоволителни хистологични резултати, но ултраструктурно ще има исхемични промени 10 минути след раждането и времето на некроза вече ще се наблюдава тежка ултраструктурна некроза. В допълнение, чрез хистоморфометричен анализ те демонстрират, че има значителни разлики между крайните ворси на плацентите, когато са фиксирани без перфузия, в сравнение с перфузионните плаценти.

Тези усложнения, свързани с токсичността, не застрашават непременно медицинското образование по анатомия, а по-скоро предоставят възможност за използване на по-добри и безопасни средства за фиксиране. Установихме, че разтворът на формалдехид може да бъде заменен с метода на Prives за фиксиране на плаценти, което води до по-качествени проби и избягване на неблагоприятни ефекти върху здравето на хората, изложени на фиксираните тъкани.

В заключение, използвайки алтернативни разтвори, които изгодно заместват формалдехида, като формулата на Prives, използвана в нашето проучване, по-добре запазват макроскопичните характеристики на плацентите, като тяхната структура, цвят и гъвкавост, без да генерират дразнеща миризма, спирайки процеса на разлагане до месец. След получените резултати, ние сме в състояние да го екстраполираме на малки животни и с бъдещи перспективи за приложение върху човешкия труп.

БИБЛИОГРАФСКА ЛИТЕРАТУРА

Ballenguer, J. J. Някои ефекти на формалдехида върху горните дихателни пътища. Ларингоскоп, 94: 1411-3, 1984. [Връзки]

Бустаманте А. М. Ф .; Prieto G. R. H. & Binvignat, G. O. Запазване на човешката плацента. Анатомична техника. Int. J. Morphol., 25 (3): 545-548, 2007. [Връзки]

Correa, A. F. Консервация на сухи анатомични парчета чрез метода на prives. Електронен вестник на ветеринарния REDVET, VI (5), 2005. Достъпно на: www.veterinaria.org/revistas/redvet/n050505/050515.pdf [Връзки]

Cowles, T. A.; Elder, F. F. & Taylor, S. Идентифициране на абнормен хромозомен комплемент във формалин-фиксирана, вложена в парафин плацентарна тъкан. Пренат. Diagn., 15 (1): 21-6, 1995. [Връзки]

Fasel, J.H .; Morel, P. & Gailloud, P. Стратегия за оцеляване за анатомия. Lancet, 365 (9461): 754, 2005. [Връзки]

Fox, G.E .; Ван Весеп, Р .; Resau, J. H. & Sun, C. C. Ефектът на потапянето на формалдехиден фиксатор върху човешкото плацентарно тегло. Арх.Патол. Лаборатория Med., 115 (7): 726-8, 1991. [Връзки]

Halder, A. & Park, Y. Идентифициране на подходящата тъкан от фиксиран с формалин перинатален материал за аутопсия за откриване на хромозомна плоидия чрез интерфазна FISH. Indian J. Med. Res., 110: 102-6, 1999. [Връзки]

Hammer, N .; Löffler, S.; Feja, C.; Bechmann, I. & Steinke, H. Възможно е заместване на формалдехид в грубата анатомия. J. Natl. Институт за рак, 103 (7): 610-1, 2011. [Връзки]

Хилдебранд, М. Анатомични препарати. Бийкли и Лос Анджелис, Университет на Калифорния, 1968. [Връзки]

Международна агенция за изследване на рака (IARC). Формалдехид, 2-бутоксиетанол и 1-трет-бутокси-2-пропанол (том 88, 2-9 юни 2004 г.). IARC Монографии за оценка на канцерогенните рискове за хората, 2004. Достъпно на: http://www.cie.iarc.fr/htdocs/announcements/vol88.htm. [Връзки]

Международна агенция за изследване на рака (IARC). Световна здравна организация. Дървен прах и формалдехид. IARC Монографии за оценка на канцерогенните рискове за хората. Том 62. Лион, IARC, 1995. [Връзки]

Imbus, H. R. Клинична оценка на пациенти с експозиция на формалдехид, свързана с оплаквания. J. Allergy Clin. Immunol., 76: 831-40, 1985. [Връзки]

Jauniaux, E.; Moscoso, J.G .; Ванесе, М.; Campbell, S. & Driver, M. Перфузионно фиксиране за плацентарно морфологично изследване. Хъм. Pathol., 22 (5): 442-9, 1991. [Връзки]

Moret de Arcia, O. J. Принос към изследването на токсичните ефекти на формалдехида, 1990 г. Достъпно на: http://www.complucad.com/frolga.htm [Връзки]

Olsen, J.H .; Jersen, S.; Hink, M .; Faurbo, K .; Breum, N. O. & Jensen, O. M. Професионално излагане на формалдехид и повишен риск от рак на носа при човека. J. J. Cancer, 34: 639-44, 1984. [Връзки]

Prieto, R.; Smok C. & Rojas, M. Опит в блога: Сравнена плацента. Int. J. Morphol., 29 (2): 432-5, 2011. [Връзки]

Ривера, М. С.; Бонино, Ф .; Фиорети, С.; Галан, М.; Gigena, S.; Moine, R.; Mouguelar, H .; Natali, J. & Quinteros, R. Многовариатен анализ, приложен към етапа на дехидратация в техниката на пластинация на конски бъбреци. Int. J. Morphol., 27 (3): 855-9, 2009. [Връзки]

Thrasher, J. D. & Kilburn, K. H. Ембрионална токсичност и тератогенност на формалдехид. Арх. Environment. Здраве., 56 (4): 300-11, 2001. [Връзки]

Viegas, S.; Ладейра, С .; Nunes, C.; Малта-Вакас, Дж .; Гомес, М.; Брито, М.; Mendonca, P. & Prista, J. Генотоксични ефекти при професионално излагане на формалдехид: Изследване в лаборатории по анатомия и патология и производство на формалдехидни смоли. J. Ок. Med. Toxicol., 5 (1): 25, 2010. [Връзки]

Адрес за кореспонденция:

Alejandra Veronica Neirreitter

Катедра по анатомия
УДЕЛАР Медицинско училище
Avda.Gral.Flores 2125
C.P.: 11800
Монтевидео
УРУГВАЙ

Получено: 16-16-2011
Приет: 23-22-2012

Цялото съдържание на това списание, с изключение на случаите, когато е идентифицирано, е под лиценз Creative Commons

Тел .: (56-45) 232 5571

Факс: (56-45) 232 5600


[email protected]