Разтваряне на пробата в смес от разтворители и титруване на свободните мастни киселини с използване на етанолов разтвор на калиев хидроксид.
а) Смес от диетилов етер и етанол от 95% (V/V), в обемно съотношение 1: 1. Той трябва да бъде неутрализиран точно по време на употреба с разтвор (b) в присъствието на 0,3 ml разтвор на фенолфталеин (c) на 100 ml смес.
б) Титруван етанолов разтвор на калиев хидроксид, 0,1 M, или ако е необходимо 0,5 M (Ако необходимото количество от 0,1 M разтвор на калиев хидроксид надвишава 10 ml, разтвор от 0, 5 M. Титруваният етанолов разтвор на калиев хидроксид може да бъде заменен с воден разтвор на калиев или натриев хидроксид, стига обемът на добавената вода да не води до разделяне на фазите).
в) Разтваряне на 10 g/l фенолфталеин в етанол от 95-96% (V/V).
Аналитична везна. Ерленмайерова колба от 250 ml и бюрета от 10 ml с деление на 0,05 ml.
Определянето ще се извърши върху филтрирана проба. Ако общото съдържание на влага и примеси е по-малко от 1%, пробата ще се използва такава, каквато е.
Вземете пробата, според очакваната степен на киселинност, съгласно следната таблица:
| Очаквана степен на киселинност | Тегло на пробата (в g) | Прецизност на претеглянето на пробата (в g) |
| 75 | 0,1 | 0,0002 |
Претеглете пробата в колбата на Ерленмайер
Пробата се разтваря в 50 до 150 ml от сместа от диетилов етер и етанол, предварително неутрализирана.
Титрувайте при разбъркване с 0,1 М разтвор на калиев хидроксид (Ако разтворът стане мътен по време на титруването, добавете достатъчно количество от сместа от разтворител, за да стане разтворът бистър), докато индикаторът се обърне (розовият цвят фенолфталеин трябва да остане поне 10 секунди).
ИЗРАЗЯВАНЕ НА КИСЕЛИНА В ПРОЦЕНТ НА ОЛЕИНОВА КИСЕЛИНА
Киселинността, изразена като процент от олеиновата киселина, е равна на:
- V: обем в ml от използвания титруван разтвор на калиев хидроксид.
- c: точна концентрация, в молове на литър, на използвания разтвор на калиев хидроксид.
- М: молекулно тегло на киселината, в която се изразява резултатът (олеинова киселина = 282)
- P: тегло в грамове на използваната проба
Като резултат се приема средната аритметична стойност на две определяния.
ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ПЕРОКСИДНИЯ ИНДЕКС
Индексът на пероксида е количеството (изразено в милиеквиваленти активен кислород на кг мазнина) на пероксиди в пробата, които причиняват окисляване на калиев йодид при описаните работни условия. Тестваната проба, разтворена в оцетна киселина и хлороформ, се обработва с разтвор на калиев йодид. Освободеният йод се титрува със стандартен разтвор на натриев тиосулфат.
3 ml стъклена лодка.
Колби със смляна шийка и запушалка, с приблизително 250 ml вместимост, предварително изсушени и пълни с чист и сух инертен газ (азот или за предпочитане въглероден диоксид).
25 или 50 ml бюрета, 0,1 ml градуирана.
Хлороформ за анализ, без кислород чрез барботиране на поток чист, сух инертен газ.
Ледена оцетна киселина за анализ, без кислород чрез барботиране на поток чист, сух инертен газ.
Прясно приготвен наситен воден разтвор на калиев йодид, без йод и йодати.
0,01 N или 0,002 N воден разтвор на натриев тиосулфат, титруван точно; оценката ще бъде направена непосредствено преди употреба.
Разтвор на нишесте, във воден разтвор от 10 g/l, прясно приготвен с разтворимо нишесте.
Пробата се взема и съхранява защитена от светлина и се съхранява в хладилник в напълно напълнени стъклени съдове, херметично затворени със смляно стъкло или коркови запушалки.
Тестът ще се извършва при дифузна естествена светлина или изкуствена светлина. Претегля се с точност до 0,001 g в стъклена лодка или, в противен случай, в колба, количество проба, в зависимост от приетата пероксидна стойност, съгласно следната таблица:
| Предполагаема стойност на пероксида (meq O 2/kg) | Тегло на тестовата проба (g) |
| от 0 до 12 | от 5,0 до 2,0 |
| от 12 до 20 | от 2,0 до 1,2 |
| от 20 до 30 | от 1,2 до 0,8 |
| от 30 до 50 | от 0,8 до 0,5 |
| от 50 до 90 | 0,5 до 0,3 |
Отворете колба и поставете стъклената лодка, съдържаща тестовата проба. Добавете 10 ml хлороформ. Бързо се разтваря пробната проба чрез разклащане. Добавете 15 ml оцетна киселина и след това 1 ml разтвор на калиев йодид. Бързо затворете колбата, разклатете 1 минута и я дръжте на тъмно точно 5 минути при температура между 15 и 25 ° C.
Добавете приблизително 75 ml дестилирана вода. Титрува се (разбърква се енергично едновременно) освободеният йод с разтвор на натриев тиосулфат (0,002 N разтвор, ако се приемат стойности по-ниски от 12 и 0,01 N разтвор, ако се приемат стойности по-големи от 12), като се използва разтворът на нишесте като индикатор.
Извършете две определяния за проба.
Извършете едновременно празен тест. Ако резултатът от празната проба надвишава 0,05 ml от 0,01 N разтвор на натриев тиосулфат, заменете реагентите.
ИЗРАЗЯВАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ
Индексът на пероксид (PI), изразен в милиеквиваленти активен кислород на кг мазнина, се изчислява, като се използва следната формула:
- V: ml стандартен разтвор на натриев тиосулфат, използван в теста, подходящо коригиран, за да се вземе предвид празният тест
- N: точна нормалност на използвания разтвор на натриев тиосулфат
- P: тегло в грамове на пробата за изпитване.
Резултатът ще бъде средната аритметична стойност на двете направени определяния
ОПРЕДЕЛЯНЕ НА ЙОДНИЯ ИНДЕКС
Определя се като теглото на йод, абсорбиран от пробата при посочените работни условия. Йодното число се изразява в грамове йод на 100 g проба.
Калиев йодид, 100 g/L разтвор, без йодати или свободен йод.
Нишестена паста (Смесете 5 g разтворимо нишесте с 30 ml вода, добавете сместа към 1000 ml вряща вода, кипете 3 минути и оставете да се охлади.)
Натриев тиосулфат стандартен обемен разтвор. (0,1 mol/l Na2S2O3 · 5H2O, титрувано най-много 7 дни преди употреба).
Разтворител, приготвен чрез смесване на равни обеми циклохексан и оцетна киселина.
Реактив на Wijs, съдържащ йод монохлорид в оцетна киселина. Ще се използва комерсиализиран Wijs реагент (реагентът съдържа 9 g ICI 3 + 9 g I 2 в оцетна киселина)
Стъклени лодки, подходящи за тестовата проба и които могат да се вмъкнат в колбите.
Ерленмайерови колби с вместимост 500 ml с отвори от шлифовано стъкло, снабдени със съответните им стъклени тапи и идеално сухи.
ПОДГОТОВКА НА ПРОБАТА ЗА АНАЛИЗ
Изсушете хомогенизираната проба с натриев сулфат и я филтрирайте.
Теглото на пробата варира в зависимост от очакваното йодно число, както е показано в таблицата:
| Прогнозирана йодна стойност | Тест на пробата |
| По-малко от 5 | 3,00 g |
| 5 - 20 | 1,00 g |
| 21 - 50 | 0,40 g |
| 51 - 100 | 0,20 g |
| 101 - 150 | 0,13 g |
| 151 - 200 | 0,10 g |
Претеглете пробата с точност до 0,1 mg в стъклена лодка за претегляне.
Поставя се пробата за изпитване в колба от 500 ml. Добавете 20 ml от разтворителя, за да се разтвори мазнината. Добавете точно 25 ml от реагента Wijs, запушете колбата, разклатете съдържанието и поставете колбата защитена от светлина. Устата не трябва да се използва за пипетиране на реагент Wijs.
Пригответе празна проба с разтворител и реактив по същия начин, но без пробата за изпитване.
За проби с йодна стойност по-малка от 150, съхранявайте колбите на тъмно в продължение на 1 час; за проби с йодна стойност по-голяма от 150, както и в случай на полимеризирани или силно окислени продукти, дръжте на тъмно в продължение на 2 часа.
След изтичане на съответното време, добавете 20 ml разтвор на калиев йодид и 150 ml вода към всяка от колбите.
Титрувайте с разтвор на натриев тиосулфат, докато жълтият цвят, получен от йода, почти напълно изчезне. Добавете няколко капки нишестена паста и продължете титруването до точния момент, когато синият цвят изчезне след много енергично разбъркване. (Позволено е потенциометрично определяне на крайната точка).
Извършете 2 определяния на тестовата проба.
ИЗРАЗЯВАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ
Йодното число се изразява, както следва:
- c: числова стойност на точната концентрация, изразена в молове на литър, на използвания стандартен обемен разтвор на натриев тиосулфат
- V 1: числена стойност на обема, изразен в милилитри, на разтвора на натриев тиосулфат, използван за празна проба.
- V 2: числена стойност на обема, изразен в милилитри, на разтвора на натриев тиосулфат, използван за определяне.
- p: числена стойност на теглото, изразено в грамове, на пробата за изпитване.
Като резултат се приема средната аритметична стойност на двете определяния, при условие че е спазено установеното изискване относно повторяемостта.
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧНО ИЗПИТВАНЕ В УЛТРАВИОЛЕТА
Спектрофотометричният тест в ултравиолетовите лъчи може да даде индикации за качеството на мазнината, нейното състояние на съхранение и модификациите, предизвикани от технологичните процеси.
Поглъщанията при дължините на вълните, посочени в метода, се дължат на наличието на конюгирани диенови и триенови системи. Стойностите на тези абсорбции се изразяват в специфична екстинкция E 1 cm 1% (екстинкция на 1% разтвор на мазнина в определения разтворител, с дебелина 1 cm), която обикновено се изразява като K, наричан още коефициент на изчезване.
Мазнината се разтваря в необходимия разтворител и екстинкцията на разтвора се определя при предписаните дължини на вълните спрямо чистия разтворител. Специфичните изчезвания се изчисляват от спектрофотометричните стойности.
МАТЕРИАЛ И АПАРАТУРА
Спектрофотометър за измерване на екстинкция в ултравиолетовия диапазон между 220 и 360 nm, с възможност за отчитане за всяка нанометрична единица.
Кварцови кювети, с капак, с 1 см оптичен път. Кюветите, пълни с вода или друг подходящ разтворител, не трябва да имат разлики между тях по-големи от 0,01 пожарогасителни единици.
Обемни колби от 25 ml.
Хроматографска колона, дълга 540 mm и диаметър 35 mm, с обратна тръба с диаметър приблизително 10 mm.
Изооктан със спектрофотометричен клас (2,2,4-триметилпентан): той трябва да има пропускливост най-малко 60% при 220 nm и най-малко 95% при 250 nm спрямо дестилирана вода; o циклохексан със спектрофотометрично качество: той трябва да има пропускливост по отношение на дестилираната вода най-малко 40% при 220 nm и най-малко 95% при 250 nm; или друг подходящ разтворител, който позволява да се получи пълно разтваряне на мазнината (например етилов алкохол за рициново масло).
Основен алуминиев триоксид за колонна хроматография, приготвен и контролиран, както е описано в допълнение I.
н-хексан за хроматография.
Пробата трябва да бъде идеално хомогенна и без суспендирани примеси. Течните масла при стайна температура се филтрират с филтърна хартия при температура приблизително 30 ° C, твърдите мазнини се хомогенизират и филтрират при температура по-висока от 10 ° C при тяхната температура на топене.
(1) Приблизително 0,25 g от приготвената проба се претеглят прецизно и се поставят в 25-милилитрова мерителна колба, допълнена с подходящ разтворител и хомогенизирана. Полученият разтвор трябва да бъде напълно бистър. Ако е облачно или облачно, ще се филтрира бързо с филтърна хартия.
Кювета се напълва с получения разтвор и измерванията се измерват, използвайки разтворителя, използван като еталон, при дължини на вълните между 232 и 276 nm. Получените стойности на екстинкция трябва да бъдат в интервала между 0,1 и 0,8; в противен случай е необходимо измерването да се повтори, като се използват по-концентрирани или по-разредени разтвори, както е подходящо.
(2) Когато се желае да се определи специфичната екстинкция след обработка с алуминиев оксид, се процедира по следния начин: 30 g основен алуминиев оксид, суспендиран в хексан, се въвеждат в колоната за хроматография; След като абсорбентът се утаи, излишният хексан се отстранява, до около 1 см над горното ниво на алуминиевия триоксид. 10 g мазнина, хомогенизирана и филтрирана, се разтварят в 100 ml хексан и този разтвор се излива върху колоната. Елуираната течност се събира и разтворителят се изпарява напълно под вакуум при температура под 25 ° С. С така получената мазнина тя се предшества непосредствено, както е посочено в раздел (1).
ИЗРАЗЯВАНЕ НА РЕЗУЛТАТИТЕ
Изразяват се специфичните екстинкции или коефициенти на екстинкция при различните дължини на вълните, изчислени, както следва:
- K l: специфично изчезване при дължина на вълната "l"
- E l: изчезване, измерено при дължина на вълната "l"
- c: концентрация на разтвора в g на 100 ml
- e: дебелина на кюветата в cm.
Резултатите трябва да бъдат изразени с два знака след десетичната запетая.
Спектрофотометричното изпитване на маслиново масло съгласно официалния метод на регламентите на ЕИО изисква определянето на специфичната екстинкция в разтвор на изооктан при дължини на вълните 232 и 270 nm и определянето на? K, дефинирано като:
където K m е специфичната екстинкция при дължина на вълната m, дължина на вълната на максимално поглъщане около 270 nm.
ПРИЛОЖЕНИЕ I: Подготовка на глинозем и контрол на активността
В контейнер, който може да бъде херметически затворен, изсипете алуминиевия оксид, предварително изсушен в пещ при 380-400 ° C за три часа, добавете дестилирана вода в пропорция 5 ml на 100 g алуминиев триоксид, бързо затворете съда, разбъркайте неколкократно и се оставя да престои поне 12 часа преди употреба.
Подгответе колона за хроматография с 30 g алуминиев триоксид. Работи се, както е описано в раздел (2). Смес, състояща се от:
- 95% необработен зехтин, със специфично изчезване при 268 nm по-малко от 0,18.
- 5% фъстъчено масло, обработено с избелващи земи в процеса на рафиниране, със специфична екстинкция при 268 nm по-голяма или равна на 4. Ако след преминаване през колоната сместа прояви специфична екстинкция при 268 nm по-голяма от 0,11, алуминиев оксид е приемлив; в противен случай процентът на хидратация трябва да бъде увеличен.
ПРИЛОЖЕНИЕ II: Настройка на спектрофотометър
Апаратурата трябва периодично да се проверява (поне на всеки шест месеца) както за съответствие на дължината на вълната, така и за точност на реакцията.
Контролът на реакцията на дължината на вълната може да се извърши чрез лампа с живачни пари или чрез подходящи филтри.
За да се контролира фотоелектрическата клетка и фотоумножителят, се процедира по следния начин: 0,2 g качество на калиев хромат за спектрофотометрия се претегля, разтваря се в мерителна колба от 1000 ml, в разтвор от 0,05 N калиев хидроксид и се допълва до маркировката. От получения разтвор се взимат точно 25 ml, прехвърлят се в колба от 500 ml и се допълват до маркировката със същия разтвор на калиев хидроксид.
Екстинкцията при 275 nm от така получения разтвор се измерва, като се използва разтвор на калиев хидроксид като еталон. Екстинкцията, измерена в кювета от 1 cm, трябва да бъде 0.200 ± 0.005.
ИЗПИТВАТЕЛЕН ПАНЕЛ ЗА ОРГАНОЛЕПТИЧНАТА ОЦЕНКА НА ДЕВИЧНО МАСЛИНО
Целта на метода е да установи необходимите критерии за оценка на характеристиките на аромата на зехтин и да разработи необходимата систематика. То се ограничава до класифициране на необработеното масло в числена скала, свързано с възприемането на неговите вкусови стимули, според преценката на група от избрани дегустатори, съставени от панел.
Количеството масло, съдържащо се във всяка чаша, трябва да бъде 15 ml и температурата от 28 ° C ± 2 ° C. Оптималното работно време е сутрин. Хората, които участват като дегустатори в органолептичните тестове на ядливи маслинови масла, трябва да бъдат обучени и подбрани според способността им да различават подобни проби, като се има предвид, че точността се подобрява с обучение. Тестът изисква брой от 8 до 12 дегустатори.