1 Експериментална станция за пасища и фуражи Индио Хатуей, Университет в Матанзас, Министерство на висшето образование. Central España Republicana, CP 44280, Matanzas, Куба.

2 Фармацевтичен факултет, Катедра по хранене и хроматология, Университет в Саламанка, Испания.

3 Катедра по ботаника и физиология на растенията, Университет в Саламанка, Испания

Ключови думи: аминокиселини; пчелен мед; прашец.

Ключови думи: аминокиселини; пчелен мед; прашец

В Куба добитъкът meliponícola се състои от всички управлявани кошери, принадлежащи към вида Melipona beecheii Bennett, 1831 (Apidae: Meliponini), регистрирани или не (Lóriga, 2015). Както във всяко друго стадо, жизненоважно е да се поддържа здравето на животните чрез действието на защитните механизми (колективни и индивидуални), осигурени от имунната система.

При пчелите тази система се състои от клетъчни и хуморални компоненти (Bulet et al., 1999). Клетъчните защитни механизми са медиирани от хемоцити, които се намират в хемолимфата и са особено въвлечени във фагоцитозата и капсулирането (Chapman, 2013). Хуморалният отговор включва синтеза на антимикробни пептиди, които действат в отговор на инфекции, произведени от бактерии, гъбички и паразити (Gätschenberger et al., 2013).

Според Gutiérrez and Orduz (2003), сред най-изследваните антимикробни пептиди е абаецинът, присъстващ в хемолимфата на пчелите, съставен от между 34 и 39 аминокиселини. Пролинът, който се откроява сред тези аминокиселини, има подчертана антимикробна активност срещу грам положителни и грам отрицателни бактерии.

За да функционират, биологичните системи се нуждаят от хранителни елементи, които идват от набор от храни, доставяни чрез диетата. При пчелите те съответстват главно на цветен прашец и нектар (Brodschneider и Crailsheim, 2010). И двете са от жизненоважно значение за имунната система на тези насекоми (Di Pasquale et al., 2013).

Въз основа на горното, поради важността на приноса на тази аминокиселина в диетата на пчелите за правилното функциониране на тяхната имунна система, тази работа има за цел да определи количеството свободен пролин, присъстващ в консумираната храна (прашец и мед ) от мелипоникола говеда в провинциите Матанзас и Маябеке.

Материали и методи

Местоположение. Изследването е проведено в два мелипонария. Единият се намира в района на Пасторита, община Матанзас, в провинция Матанзас, а другият е разположен в района на Северния популярен съвет на община Сан Николас, в Маябеке.

Проби Случайно бяха избрани 10 кошера, по пет във всеки сценарий. В Mayabeque бяха избрани кошери 14, 2, 48, 5 и 6. В Matanzas бяха избрани кошери 1, 9, 11, 12 и 13. Във всеки от кошерите 60 g прашец на мелипоникола и 80 ml мед. Вземането на проби е извършено през април 2018 г.

Калибрационна крива. Установено е чрез използване на пролинови стандарти с различна концентрация, подложени на същия процес, посочен за пробите. Кривата на калибриране е разработена с данните за абсорбцията на стандартите от различните концентрации на пролин и е намерено уравнението на калибрационната линия.

Определяне на свободния пролин в меда. 2,5 g хомогенизиран мед се претеглят с точност до 0,1 mg. Те бяха разтворени във вода с помощта на магнитната бъркалка. След това те се прехвърлят в 5 ml мерителна колба и разтворът се долива до маркировката. Впоследствие се вземат 0,5 ml и се добавят 0,25 ml 98% мравчена киселина (H-COOH) от доставчика на лабораторни материали PROLABO и 1 ml 3% разтвор на нинхидрин. По същия начин се приготвя заготовка, в която работният разтвор се заменя с 0,5 ml дестилирана вода. Впоследствие епруветките бяха затворени, разклатени и държани в продължение на 15 минути във вряща водна баня. След като този процес приключи, те се изваждат от горещата вода и се оставят да се охладят до стайна температура за 5 минути. Добавят се 5 ml от разтвора на изопропанол-вода и се разбърква енергично. И накрая, абсорбцията беше измерена при 517 nm по отношение на заготовката, която също беше обработена през 35-те минути, следващи охлаждането.

Изчисления и изразяване на резултатите. Ако C е µg/ml пролин, получен от калибрационната крива, а P (g) е теглото на меда, който е използван в анализираната проба, ще е необходимо да:

mg/kg мед = 5C/P

Определяне на пролин в цветен прашец. Свободните аминокиселини бяха извлечени. За целта те се претеглят с точност от приблизително 0,1 mg, добавят се 0,25 g цветен прашец на meliponícola и 25 ml 80% етанол. Впоследствие, в продължение на 30 секунди, разтворът се разбива със соникатора. След това те бяха подложени на разбъркване в продължение на 15 минути, преди да се пристъпи към центрофугиране (5 минути при 10 000 rpm) и декантиране на супернатантата. Тази процедура на екстракция беше извършена още два пъти върху утайката. Полученият етанолов екстракт се довежда до сухо в ротационен изпарител, без да надвишава 40 ° С. След това остатъкът се суспендира отново в ултрачиста вода и се долива до 25 ml. За неговото филтриране са използвани 0,45 микрона милипорни филтри. Накрая се вземат 0,5 ml от филтрата и се процедира както при определянето в мед.

Изчисления и изразяване на резултатите. Ако x е концентрацията на пролин, измерена на калибрационната линия, тогава:

В 25 ml, mg pro = x x 25/1000 = C

В P (g) цветен прашец, mg пролин/g цветен прашец = C/P

Статистически анализ. След проверка на съответствието с предположенията за хомогенност на дисперсията с помощта на теста на Levene и след нормалното разпределение на данните, според Shapiro-Wilk, е извършен прост анализ на дисперсията (ANOVA). Използван е статистическият пакет Infostat ®, версия 1.1. За сравнение на средните показатели е извършен тест с множество обхвати на Дънкан за ниво на значимост на p Truzzi et al. (2014), които откриват разлики в количествата пролин, според ботаническия произход.

диетата

Фигура 1 Количество пролин в меда от кошерите на Matanzas и Mayabeque.

В Чили Sanhueza-Rojas (2016) получава подобни резултати, когато анализира проби от мед от Apis mellifera Linnaeus, 1758. Този автор съобщава за голяма променливост в стойностите на пролин, дори за проби от същия сектор и сходен флорален произход. Това се обяснява, тъй като в конкретния случай на мед важна част от пролина се осигурява от пчелата и произхожда от прашеца, консумиран през първите етапи от живота си (Crane, 1990).

Според Bosi и Battaglini (1978), истинският мед от Apis mellifera трябва да съдържа минимум 180 mg пролин/kg мед. Необходимо е обаче да се има предвид, че има големи вариации в зависимост от вида на меда и рода на пчелите, от които произхожда. В настоящото проучване нито един от пробите мед не показва количества пролин, близки до тази стойност.

Поленът, според Brodschneider и Crailsheim (2010), е един от най-важните компоненти в диетата на пчелите и представлява основният източник на протеин/аминокиселина. Както е показано на фигура 2, стойностите на пролин, открити в полен от Matanzas, варират от 4,2 до 19,5 mg/g. Открояваше се кошер 12, където беше открито най-голямо количество пролин, което се различаваше статистически от това в останалите кошери. Кошера 9 беше този с най-нисък резултат, въпреки че не се различаваше статистически от този, получен в 11, и във всички кошери, принадлежащи на Mayabeque.

Фигура 2. Количество пролин в цветен прашец на суха основа от кошерите на Matanzas и Mayabeque

От друга страна, не са открити значителни разлики в концентрацията на пролин в кошерите на Mayabeque (фигура 2). Стойностите бяха между 5,9 и 7,1 mg/g.

Тези резултати са в рамките на параметрите, докладвани от Baldi-Coronel et al. (2004) в броматологични изследвания на аржентински полени, при които са открити стойности на пролин от 2,30 mg/g до 24,30 mg/g. Пролинът обикновено е най-важната свободна аминокиселина в зрелите полени. Същото не се случва при прясно събраните.

Резултатите потвърждават, че медът като полени, които представляват хранителни източници, достъпни за говедата meliponícola от двете провинции, имат адекватен дял на пролин, въпреки че кошерите в провинция Matanzas показват по-високо производство на това вещество. Следователно масата на говедата meliponícola, разположена в районите на Matanzas и Mayabeque, има в диетата си аминокиселинната поддръжка, необходима за развитието на адекватен имунен отговор на всеки микробен агент.

Благодарни сме на Швейцарската агенция за сътрудничество и развитие (SDC) за нейния принос за финансирането на това изследване чрез проекта BIOMAS-Куба, във фаза III.

Изразява се благодарност и към групата изследователи от Фармацевтичния факултет, областта на храненето и хроматологията на Университета в Саламанка.

Балди-Коронел, Берта; Grasso, D.; Chaves-Pereira, Silvia & Fernández, G. Броматологична характеристика на арлентинския пчелен прашец. Наука, преподаване и технологии. 15 (29): 145-181, 2004. [Връзки]

Bosi, G. & Battaglini, M. Газов хроматографски анализ на свободни и протеинови аминокиселини в някои едноцветни медове. J. Apicult. Рез. 17: 152-166, 1978 г. DOI: https://doi.org/10.1080/00218839.1978.11099920. [Връзки]

Brodschneider, R. & Crailsheim, K. Хранене и здраве при медоносните пчели. Апидология. 41 (3): 278-294, 2010. DOI https://doi.org/10.1051/apido/2010012 [Връзки]

Chapman, R. F. Насекомите, структура и функция. 5-то изд. Кеймбридж, Англия: Cambridge University Press, 2013. [Връзки]

Крейн, Ева. Пчелите и пчеларството. Наука, практика и световни ресурси. Ню Йорк: Cornell University Press, 1990. [Връзки]

Ди Паскуале, Джорджия; Салиньон, Марион; Le Conte, Y .; Belzunces, L. P.; Decourtye, A .; Kretzschmar, A. et al. Влияние на поленовото хранене върху здравето на пчелите: имат ли значение качеството и разнообразието на полените? PLOS ONE. 8 (8): e72016, 2013. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0072016. [Връзки]

Gätschenberger, H .; Аззами, К.; Tautz, J. & Beier, H. Антибактериалната имунна компетентност на медоносните пчели (Apis mellifera) е адаптирана към различни етапи от живота и рисковете за околната среда. PLOS ONE. 8 (6): e66415, 2013. DOI: http://doi.org/10.1371/journal.pone.0066415. [Връзки]

Gutiérrez, P. & Orduz, S. Антимикробни пептиди: структура, функция и приложения. Текущ. Biol.25 (78): 5-15, 2003. DOI: http://doi.org/10.17533/udea.acbi. [Връзки]

Lóriga, W. Характеристика на пчелите, кошерите, системата за управление и здравния статус на Melipona beecheii Bennett (Apidae, Meliponini) в райони на Западна Куба. Докторска дисертация. Сан Хосе де лас Лахас, Куба: Факултет по ветеринарна медицина, Аграрен университет в Хавана, 2015 г. [Връзки]

Sanhueza-Rojas, O. H. Многофакторна химическа характеристика на меда по отношение на инфекция с Nosema ceranae при пчелите, антимикробна активност и географски произход на продукта. Представен доклад, за да се класирате за званието химик. Сантяго де Чили: Факултет по химични и фармацевтични науки, Катедра по неорганична и аналитична химия, Университет на Чили, 2016 г. [Връзки]

Труци, С .; Анибалди, А.; Илюминати, S .; Finale, C. & Scarponi, G. Определяне на пролин в меда: сравнение между официалните методи, оптимизиране и валидиране на аналитичната методология. Food Chem. 150: 477-481, 2014. DOI: http://doi.org/10.1016/j.foodchem.2013.11.003. [Връзки]

1 ▲ Доклад, представен на V Международна конвенция за аграрно развитие 2019, проведена от 22 до 26 октомври 2019 г. Конгресен център Plaza América. Варадеро, Куба.

2 ▲ Доклад, представен в 5-та международна конвенция Agrodesarrollo 2019, отбелязана на 22-26 октомври 2019 г. Plaza America Convention Center. Варадеро, Куба

Получено: 18 юли 2019 г .; Одобрен: 26 август 2019 г.

Това е статия, публикувана в отворен достъп под лиценз Creative Commons