mycoplasma

В
В 		В

Персонализирани услуги

Списание

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Член

  • Испански (pdf)
  • Статия в XML
  • Препратки към статии
  • Как да цитирам тази статия
  • SciELO Analytics
  • Автоматичен превод
  • Изпратете статия по имейл

Индикатори

  • Цитирано от SciELO

Свързани връзки

  • Подобно в SciELO

Дял

Перуански вестник за експериментална медицина и обществено здраве

печатна версия В ISSN 1726-4634

Преподобни Перу. мед. опит. обществено здраве В т. 24 В п. Лима Април/юни В 2007

ОРИГИНАЛНИ ПРЕДМЕТИ

PCR-Multiple за диагностика на Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum

MГєltiplex-PCR за диагностика на Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum

Ключови думи: Микоплазмени инфекции; Инфекции на уреаплазма, верижна реакция на полимераза, негонококов уретрит (източник: DeCS BIREME).

Ключови думи: Микоплазмени инфекции; Инфекции на уреаплазма; полимеразна верижна реакция; Негонококален уретрит (източник: DeCS BIREME).

ВЪВЕДЕНИЕ

Видовете микоплазма и уреаплазма са свързани с различни заболявания на дихателните и урогениталните пътища, както при жените, мъжете, така и при децата. Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium, Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum са най-често идентифицираните видове1.

Тези микроорганизми, принадлежащи към клас Mollicutes, се считат за изключително трудни за тяхното размножаване in vitro, както поради хранителните изисквания за тяхното размножаване, така и поради подчертаната им чувствителност към промени в рН, температура, осмотично налягане, ултравиолетови лъчи, повърхностноактивни вещества, антитела и допълнение, факт, който прави изолацията чрез бактериологична култура трудна2,3.

МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ

РЕФЕРЕНТНА ДНК ПРОБА

НАЧАЛНИ КОМПЛЕКТИ ЗА МЕТОДА PCR-MÁLTIPLE

Използвани са праймерите MgPaF-MgPaR, комплементарни на регион на адхезивния ген на гена M. genitalium (MgPa), описан от Jensen et al.6, набор от праймери, допълващ фрагмент от 280 bp от РНК гена 16S рибозомна РНК от M. hominis и два комплекта праймери, единият от които допълва фрагмент от спейсърния регион между 16S и 23S рибозомните РНК гени на U. parvum, а другият набор допълва фрагмент от спейсърния регион, съседен на уреазата ген и специфичен за U. urealyticum, описан от FernÃndez et al.7 (Таблица 1).

РЕАКЦИОННА СМЕС

Усилване на ДНК

Амплификацията на ДНК се извършва в термичен циклер "Personal MastercyclerR" (Eppendorf, Германия), като се коригират условията за амплификация на ДНК на референтните щамове, програмирани при 95 ° С за четири минути, последвани от цикли от 94 ° С за 30 секунди, тестване с три различни температури на хибридизация: 55, 57 и 60 ° С за 30 секунди и 72 ° С за една минута, с окончателно удължаване при 72 ° С за пет минути, оценяване с 35 и 40 цикъла.

АНАЛИЗ НА УСЛОВНИТЕ ПРОДУКТИ

ИЗПИТВАНЕ С КЛИНИЧНИ ПРОБИ

Анализирани са 34 проби от уретрален ексудат, отрицателни при тестовете за откриване на Neisseria gonorrheae, от същия брой пациенти от мъжки пол, посещавали Микробиологичната лаборатория на Военна болница "Карлос Хуан Финлей", в периода от октомври до декември от 2005г.

ИЗВЕЖДАНЕ НА ПРОБА ДНК

PCR-КЛАС МОЛИКУТИ

ДНК, получена от всяка клинична проба, беше анализирана с помощта на PCR-специфичен клас за Mollicutes, както е описано от FernÃndez et al.8, тези, които са положителни, са подложени на Multiple-PCR за идентифициране на изследваните видове.

PCR-МНОЖЕСТВО ЗА ИДЕНТИФИКАЦИЯ НА Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum И Ureaplasma urealyticum

В реакционна смес, с краен обем 50 μL, бяха добавени четирите комплекта праймери, описани по-горе. За амплифицирането на ДНК на клиничните проби беше използвана програмата, използвана при амплификацията на референтната ДНК. Амплифицираните продукти се анализират, както е описано по-горе.

От изследваните клинични проби от уретрален ексудат 79,4% (27/34) са идентифицирани като положителни за Mollicutes от PCR-класа. От тях чрез Multiple-PCR; 14,8% (4/27) са положителни за М. genitalium; 18,5% (5/27) до M. hominis, докато 11,1% (3/27) са идентифицирани като U. urealyticum и 3,7% (1/27) като U. parvum. Останалите 55,6% (15/27) не отговарят на нито един от изследваните видове (Таблица 2). Две от пробите са коинфектирани, една с M. hominis и U. parvum, а друга с M. hominis и U. urealyticum.

При изследването на клинични проби от уретрален ексудат положителността на M. genitalium съвпада с резултатите, получени при други изследвания. Gubelin et al.11, изследвано чрез PCR, наличието на M. genitalium в проби от уретрален секрет от 23 мъже с UNG, откриващи този вид в 13.04%, откривайки също Ureaplasma spp. в 34,7% от пробите. В проучване, проведено в Турция, честотата на M. genitalium е изследвана в проби от урина от 63 пациенти със симптоми на уретрит, като е установено 6,3% положителност, както и 4,8% за U. urealyticum и 3,2% при M. hominis12.

БИБЛИОГРАФСКА ЛИТЕРАТУРА

1. Тейлър-Робинсън D, Ainsworth JG, McCormack WM. Генитални микоплазми. В: Holmes KK, Sparling, PF, Mardh P-A, et al. Венерически болести. Ню Йорк: McGraw-Hill; 2004. стр. 533-48. [Връзки]

2. Rivera- Tapia JA, Rodríguez-Preval N. Микоплазми и антибиотици. Salud PÃblica Mex. 2006; 48 (1): 1-2. [Връзки]

3. Stellrecht K, Woron A, Mishrik N, Venezia R. Сравнение на мултиплекс PCR анализ с култура за откриване на генитални микоплазми. J Clin Microbiol. 2004; 42 (4): 1528-33. [Връзки]

4. Yoshida T, Maeda S, Deguchi T, MiyazawaT, Ishiko H. Бързо откриване на Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealyticum организми в пикочно-половите проби чрез PCR-тест за хибридизация на микротитърни плочи. J Clin Microbiol. 2003; 41 (5): 1850-55. [Връзки]

5. Takahashi S, Takeyama K, Miyamoto S, Ichihara K, Maeda T, Kunishima Y, et al. Откриване на ДНК на Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Ureaplasma parvum в урина от асимптоматични здрави млади японски мъже. J Инфекциозен химиотер. 2006; 12 (5): 269-71. [Връзки]

6. Jensen JS, Bjornelius E, Dohn B, Lidbrink P. Използване на TaqMan 5В ’нуклеаза PCR в реално време за количествено откриване на ДНК на Mycoplasma genitalium при мъже със и без уретрит, които са присъствали в клиника за полово предавани болести. J Clinic Microbiol. 2004; 42 (2): 683-92. [Връзки]

9. Svenstrup HF, Jensen JS, Bj¶¶rnelius E, Lidbrink P, Birkelund S, Christiansen G. Развитие на количествено реално ? време PCR анализ за откриване на Mycoplasma genitalium. J Clin Microbiol. 2005; 43 (7): 3121- 28. [Връзки]

10. Stellrecht K, Woron A, Mishrik N, Venezia R. Сравнение на мултиплекс PCR анализ с култура за откриване на генитални микоплазми. J Clin Microbiol. 2004; 42 (4): 1528-33. [Връзки]

12. Dolapci I, Tekeli A, Ozsan M, Yaman O, Ergin S, Elhan A. Откриване на Mycoplasma genitalium при пациенти от мъжки пол със симптоми на уретрит в Турция чрез полимеразна верижна реакция. Saudi Med J. 2005; 26 (1): 64-68. [Връзки]

13. Кийн FE, Thomas BJ, Gilroy CB. Асоциацията на Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma genitalium с бактериална вагиноза: наблюдения върху хетеросексуални жени и техните мъжки партньори. Int J STD СПИН. 2000; 11 (6): 356-60. [Връзки]

14. Schlicht MJ, Lovrich SD, Sartin JS, Karpinsky P, Callister SM, Agger WA. Високо разпространение на генитални микоплазми сред сексуално активни млади хора със симптоми на уретрит или цервицит в La Crosse, Wisconsin. J Clin Microbiol. 2004; 42 (10): 4636-40. [Връзки]

15. Deguchi T, Yoshida T, Miyazawa T, Yasuda M, Tamaki M, Ishiko H, et al. Асоциация на Ureaplasma urealyticum (Biovar 2) с негонококов уретрит. Sex Transm Dis. 2004; 31 (3): 192-95. [Връзки]

16. Тейлър-Робинсън D, Gilroy CB, Кийн FE. Откриване на няколко вида Mycoplasma на различни анатомични места на хомосексуални мъже. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2003; 22 (5): 291-93. [Връзки]

Кореспонденция:
Надя Родригес Превал.
Институт по тропическа медицина "Педро КурГВ".
Адрес: Autopista Novia del MediodГa Km 6 ВЅ, AP 601, Марианао 13. Град Хавана., Куба.
Имейл: [email protected]

В Цялото съдържание на това списание, с изключение на случаите, когато е идентифицирано, е под лиценз Creative Commons