УНИВЕРСИТЕТ СИМОН БОЛВАР ДИКАН НА ПОДГРАМНИТЕ ИЗСЛЕДВАНИЯ ХРАНА НАУКА И ХРАНЕНЕ КООРДИНАЦИЯ МАГИСТЪР ПО ХРАНА НАУКА РАБОТА АЛЕРГИЧЕН КАПАЦИТЕТ НА КВИНЧОНШО ПРОТЕИН (Cajanus cajan) октомври 2010 г. Габриел Хосе Гразе
УНИВЕРСИТЕТСКИ СИМЕН БОЛВАР ДЕКАНАТ ЗА ПОСЛЕДНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ ХРАНИ НАУКА И ХРАНЕНЕ КООРДИНАЦИЯ МАГИСТЪР ПО ХРАНА НАУКА АЛЕРГЕНЕН КАПАЦИТЕТ НА КВИНЧОНШО ПРОТЕИН (Cajanus cajan) Бакалавърска работа, представена в магистърската степен по университет в университета Симон Наука Съветът на професора: преподавател Алексия Торес Педро Асо Котутор октомври 2010 г.
iv ПОСВЕТЕНИЕ С цялата си любов към паметта на майка ми Роза Гонсалес и моите баба и дядо Педро Гонсалес и Мерцедес Прада де Гонсалес, които винаги ще бъдат живи в сърцето ми. Техните учения, ценности и принципи са най-голямото богатство, което са успели да ми предложат.
viii 2.5.2) Откриване и количествено определяне на ендотоксини, използвайки метода 38 Gel-Clot. 2.5.3) Модел на интраперитонеална сенсибилизация (i.p). 40 2.5.4) Анализ на хомоложна пасивна кожна анафилаксия (ACPH). 41 2.6) Косвен ензимно-свързан имуносорбентен тест за откриване на миши IgG (ELISA). 42 2.6.1) Определяне на оптималното разреждане на конюгата на анти-мишка igg. 42 2.6.2) Определяне на оптималното разреждане за антиген и антисерум. 42 2.6.3) Общ протокол на индиректна ELISA за откриване на специфични миши IgGs. 44 2.7) Статистически анализ . 45 ГЛАВА III: РЕЗУЛТАТИ И ДИСКУСИЯ 47 3.1) Химичен анализ на квинчончо протеини. 47 3.2) Протеинова електрофореза 47 3.3) Анализ на хомоложна пасивна кожна анафилаксия (ACPH). 53 3.4) Косвен ELISA за откриване на специфичен за мишки IgG. 64 3.4.1) Определяне на оптималното разреждане на конюгата против мишка igg. 64 3.4.2) Косвен ELISA за определяне на разреждането на миши серум и концентрацията на антигена. 65 3.4.3) Общ протокол на индиректния ELISA за откриване на специфични миши IgG. 66 ГЛАВА IV: ЗАКЛЮЧЕНИЯ И ПРЕПОРЪКИ . 71 4.1) Заключения . 71 4.2) Препоръки . 72 ГЛАВА V: ПРЕПОРЪКИ . 73 ГЛАВА VI: ПРИЛОЖЕНИЯ 80
ИНДЕКС НА ФИГУРИТЕ ix Фигури Страница 1.1. Нетоксични нежелани реакции към храната. 20 3.1. SDS-PAGE протеинови екстракти от сухо зелено птиче месо. 48 3.2. SDS-PAGE протеинови екстракти от сух зелен гълъбов грах, лупина и соя 48 3.3. ACPH анализ за зелен птичи протеин. 54 3.4. ACPH анализ за сух птичи протеин. 56 3.5. ACPH анализ за лупинов протеин. 57 3.6. Директен ELISA за определяне на оптималното разреждане на конюгата. 64 3.7. Непряк ELISA за определяне на мишко серумно разреждане и концентрация на антиген. 65 3.8. Специфични нива на IgG срещу протеин от зелен гълъбов грах. 66 3.9. Специфични нива на IgG срещу сух птичи протеин. 67 3.10. Специфични нива на IgG срещу лупинов протеин. 68
СПИСЪК НА СЪКРАЩЕНИЯТА x Ac: антитела. ACPH: хомоложна пасивна кожна анафилаксия. Ag: антиген. ANOVA: дисперсионен анализ. AOAC: Асоциация на официалните аналитични химици. CD: клъстер на диференциацията. ЦИЕ: стандартен контрол на ендотоксини. HCM: основен комплекс за хистосъвместимост. APC: антиген представяща клетка. КОВЕНИН: Венецуелска комисия по индустриални стандарти. DS: стандартно отклонение. ELISA: ензимно-свързан имуносорбентен анализ. ФАО: Организация за прехрана и земеделие. IAA: индекс на абсорбция на вода. IFBC: Международен съвет по биотехнологии. Ig: имуноглобулини. IL: интерлевкин. ILSI: Международен институт за наука за живота. ISO: Международна организация за стандартизация ИТ: инхибитори на трипсин. ITAM: тирозинов имунорецептор. HACCP: анализ на опасностите и критични контролни точки. LAL: амебоцитен лизат на Limulus polyphemus. LPS: липополизахариди. МАЛТ: лимфоидни тъкани, свързани с лигавицата. MG: геометрична средна стойност. nsltps: неспецифични липидотранспортиращи протеини. PCR: полимеразна верижна реакция. PER: коефициент на протеинова ефективност. RCB: В-клетъчен антигенен рецептор. S: svedberg. SSF: физиологичен физиологичен разтвор. TGF-β: туморен растежен фактор β. ЕС: ендотоксинови единици. КОЙ: Световната здравна организация.