Библиометрични данни:
Citescore: 0.4 | Ранг на списание SCImago: 0,12 | Google Scholar: 0.0172

съдовата

Списание според стандартите "Единни изисквания за ръкописи, изпратени в биомедицински списания" www.icmje.org

Списанието се придържа към принципите и процедурите, продиктувани от "Комитета по публикационна етика (COPE)" www.publicationethics.org

Списанието се придържа към принципите на прозрачността и най-добрите практики в публикациите на DOAJ www.doaj.org

(PDF) Rev Osteoporos Metab Miner. 2017 г .; 9 (4): 139-144
DOI: http://dx.doi.org/10.4321/S1889-836X2017000400006

Ключови думи: съдова калцификация, miR-377, SOD-2, оксидативен стрес, BMD.

Въведение
Съдовата калцификация (CV) е една от най-честите промени в стареенето, но особено при пациенти с хронично бъбречно заболяване (ХБН). Увеличението на реактивните кислородни видове в отговор на претоварвания с фосфор (P), което се случва по време на CV, допринася за фенотипната дедиференциация на съдовите гладкомускулни клетки (VSMC) от строго мускулен (контрактилен) фенотип до остеобластичен фенотип. 1-4. По-конкретно, известно е, че водородният пероксид, един от най-често срещаните реактивни кислородни видове, е способен да индуцира експресията на остеобластичния транскрипционен фактор Cbfa1/RUNX2 и да индуцира калцификация 5,6 .
МикроРНК (miRs) са малки РНК (

22 нуклеотиди) едноверижни некодиращи среди, които медиират пост-транскрипционно заглушаване на гени чрез свързване чрез комплементарност на базата към 3'UTR региона на целевите иРНК. MiRs участват в решаващи биологични процеси, включително клетъчна пролиферация, диференциация и развитие на тъканите 7,8. Последните проучвания показват, че няколко miRs са важни регулатори на диференциацията на VSMC в остеобластоподобни клетки и следователно на съдовата калцификация 9-12 .
MiR-377 се появява като важен регулатор на стареенето чрез регулиране, наред с другото, на ензима супероксид дисмутаза 2 (SOD-2) 13,14. SOD е основният антиоксидант в организма, катализиращ превръщането на супероксидния радикал във водороден прекис. SOD-2 съответства на митохондриалната форма на ензима. Многобройни трудове са изследвали ролята на оксидативния стрес като индуктор на CV, така че в настоящото изследване предлагаме да се анализира in vivo модел на възможната роля на miR-377 като регулатор на минерализацията на аортата.

Биохимични маркери
Серумът Ca, P и креатининът и креатининът в урината се измерват с помощта на многоканален автоматизиран анализатор Hitachi 717 (Boehringer Mannheim, Берлин, Германия). Серумният паратормон (PTH) беше измерен чрез ELISA (Immutopics, San Juan Capristano, USA), следвайки протоколите на производителя. Растежният фактор на фибробластите 23 (FGF23) се определя чрез комплект ELISA (Kainos Laboratories, Япония).

Денситометрия на костите
КМП се измерва в пищяла на три нива: проксимално осмо, дистално седмо/осмо и пищяло, с двуенергиен цифров радиологичен денситометър Hologic QDR-1000 (Hologic, Bedford, USA), оборудван със специфична програма за малки животни.

Анализ на калциране на аортата
Калцификацията на коремната аорта на плъховете се анализира, като се използва общото съдържание на Ca. За да се определи общото съдържание на Ca, фрагмент от коремната аорта (този, който е най-близо до свода на аортата) се хомогенизира с Ultraturrax (OmniHT) в 0.6N HCI.След разклащане при 4 ° С в продължение на 24 часа пробите се центрофугират. Съдържанието на Са се определя в супернатанта по метода на о-крезолфталеиновия комплекс (Sigma-Aldrich, Сан Луис, САЩ) и пелетата се ресуспендира в лизисен буфер (125 mM Tris и 2% SDS, рН 6.8) за екстракция на протеин и количествено определяне по метода на Лоури (Bio-Rad, Херкулес, САЩ). Съдържанието на Са се нормализира, изразявайки се в µg Са на мг протеин.

Изследване на генната експресия
Екстракцията на РНК се извършва по метода гуанидиний тиоцианат-фенол-хлороформ. Копираща ДНК (cDNA) се синтезира с помощта на комплект за обратна транскрипция Taqman MicroRNA (Applied Biosystems, Foster City, USA). Експресията на ген на miR-377 беше анализирана чрез PCR в реално време (qPCR) на системата Stratagene Mx3005P QPCR (Agilent Technologies, Санта Клара, САЩ). За PCR се използва анализ при поискване, проектиран от Applied Biosystems, използващ специфични олиго и флуоресцентни Taqman сонди. За количествено определяне и нормализиране се използва експресията на ядрена РНК U6.

Уестърн петно
След прехвърляне мембраните се инкубират в продължение на 12 часа с анти SOD-2 антитела (1: 1000, Cell Signaling Technology, Danvers, USA) и anti-GAPDH (1: 5000, Santa Cruz Biotechnology, Dallas, USA.). Вторично свързване на антитела беше открито с ECL Advance Western Blot Detection Kit (Amersham Bioscience, Бъкингамшир, Великобритания) и с VersaDoc 4000 Imaging Model System (Bio-Rad).

Статистически анализ
За статистическия анализ на резултатите е използвана програмата SPSS 17.0. В случай на променливи с нормално разпределение, сравнението на лекуваните групи се извършва чрез дисперсионен анализ (ANOVA) с теста на Bonferroni. В случай на променливи с ненормално разпределение се използва тестът на Крускал-Уолис.

Резултати
Нефректомията намалява креатининовия клирънс, ефект, който не се влошава при животните, които са приемали диетата с високо съдържание на P (Таблица 1). Наблюдава се умерено, но незначително увеличение на серумния Р при нефректомирани животни, което е по-забележимо при тези, които получават диета с висок Р. Въпреки това, малки повишения в серумния Р са свързани с по-значимо повишаване на серумните нива на Р. FGF23. Серумните нива на FGF23 са се удвоили при нефректомия, докато повишението на серумния Р е било по-малко от 50%. По същия начин при животните, които са получавали диета с високо съдържание на P (CRI + PA), нивата на FGF23 са се увеличили два пъти в сравнение с тези при нормалната диета (CRI + PN), като увеличението на серумния P е по-малко от 25%.

Нефректомията няма ефект върху промените в КМП в пищяла, въпреки че в групата CRI + PA BMD в проксималната част на пищяла намалява значително в сравнение с групата CRI + PN и в сравнение с групата Sham (Таблица 1).
В групата IRC + PN съдържанието на Са в аортата се е увеличило 3 пъти в сравнение с групата Sham. Увеличението по отношение на групата Sham е увеличено до 17 пъти в групата IRC + PA. Експресията на miR-377 намалява с 65% при нефректомия, без да се наблюдава допълнителен ефект при диетата с висок Р. Всъщност креатининовият клирънс е биохимичният параметър, който е най-силно свързан с експресията на този miR. ( r = 0,83; p = 0,001). За разлика от това, серумният Р не е свързан с експресията на miR-377 (r = -0.302; p = 0.34).
Експресията на протеин на SOD-2 очевидно се увеличава с нефректомия (повече от 3 пъти), ефект, който става по-забележим при нефректомираните животни с диета с високо съдържание на P (повече от 6 пъти).

Конфликт на интереси: Авторите декларират, че не са в конфликт на интереси.

Манипулациите с опитни животни са извършени в съответствие с разпоредбите на действащите правни разпоредби (Директива на Европейския съюз 2010/63/ЕС и Кралски указ 53/2013 от 1 февруари).