В природата се срещат образуващи се микроорганизми смесени популации с други видове микроорганизми. Следователно се наричат културите на тези смеси смесени култури. Познаването на микроорганизмите обаче се постига чрез изучаване на изолирани щамове, култивирани в лабораторията през чисти култури (или аксонично). Понякога молекулярно изследване води до характеризиране на микроорганизмите, дори в смесени популации. Идентифицирането и пълното характеризиране на бактериите обаче е възможно само след изолиране на бактерията и получаване на чисти култури. Поради тази причина първият проблем при изследване на бактерията е нейната изолация от останалите присъстващи микроорганизми (в патологична проба, вода, почва, храна и др.). След като бъде постигната изолация, е възможно да се получат бактериите, които представляват интерес чисто отглеждане.
1. Изолация
Това е отделянето на определен микроорганизъм от останалите микроорганизми, които го придружават. Най-често срещаният метод е ивично засяване върху подходяща твърда хранителна среда, поставена в чашка на Петри.
За целта се взема малко количество проба с платинена верига и се разпределя по повърхността на хранителната среда. В средата бактериалните клетки се отделят и обездвижват. След инкубация при подходящи условия, всеки жизнеспособна клетка произхожда a Предградие видим резултат от последователни клетъчни деления. Всяка бактериална колония има определени характеристики по отношение на формата, границата, височината, размера, консистенцията и др. Видовете бактерии, присъстващи в оригиналната проба, се виждат като различни видове колонии. От достатъчно отделени колонии е възможно да се получи чиста култура на всеки от видовете бактерии, присъстващи в оригиналната проба...
Успехът на изолирането, на отделянето върху хранителната среда, зависи от повърхността, върху която е разпределена пробата. Много е важно да направите колкото се може повече стрии. В първите ивици ще се появят сливащи се колонии или непрекъсната маса от микроорганизми. Колониите, отделени една от друга, трябва да се появят във финалните ивици. Изолирането изисква ниско начално инокулум. Последователното намаляване на размера на популацията на цикъла (поради изхвърляне върху културалната среда) при пътуване през културната среда, трябва да гарантира, че накрая някои клетки остават достатъчно отделени (изолирани една от друга) на повърхността
Критерии за диференциация на колониите
Външният вид на колониите, тяхното оцветяване, размер и др. Те позволяват да се диференцират различни бактерии, въпреки че техните общи свойства са силно повлияни от условията на култивиране, така че по-долу е направено много общо описание. Колониите могат да бъдат непрозрачни, полупрозрачни или прозрачни. Някои произвеждат флуоресцентни пигменти, когато са осветени с ултравиолетова светлина. Други се появяват с прахообразна повърхност, други са гладки или грапави или имат концентрични пръстени. Понякога миризмата също е характерна
профилен изглед на бактериални колонии на TSA
Колония на Серратия: лигавичен вид, започва да пигментира в централната част
2. Получаване на чисти култури
Това включва получаване на култура от един микробен тип в хранителна среда, например в наклонена тръба с хранителен агар. За целта се отделя малко количество бактериална маса от отделена колония. С него се инокулира нова хранителна среда, като прави ивици плътно заедно. Инкубацията при подходящи условия ще осигури чиста култура. Процесът може да се повтори за всеки тип колония. Ще бъде получена колекция от чисти, отделни култури от микроорганизмите, съжителстващи в оригиналната проба
.Препоръчително е да се направи втора изолация, преди да се пристъпи към получаване на чиста култура. Ако всички колонии на втората плоча са идентични, една от тях може да се използва за установяване на чиста култура. След като културата е чиста, е удобно да се провери нейната чистота с помощта на Грам оцветяване. Чистите култури от микроорганизми се поддържат в лабораторията от презасяване (преминаване от една културна среда към друга) последователно. Едно от копията може да бъде лиофилизирано за съхранение