Субекти
Обобщение
Главен
Spitz nevus е придобита меланоцитна лезия, която обикновено се развива при деца и юноши, въпреки че не е необичайна при възрастни. Класически се смята, че е доброкачествен и се управлява консервативно. Обаче от описанието му през 1948 г. от Софи Шпиц, 1 неговата диагноза предизвиква безпокойство, тъй като не винаги е възможно да се направи недвусмислена диагноза Spitz nevus срещу меланом.
Въпреки че някои характеристики сега се оценяват систематично, за да се прави разлика между невусите на Spitz и меланомите, различните експерти могат да се различават при определянето на относителната важност на всеки от следните критерии: размер, форма, ограничение на кръстосаните гнезда, разпространение нагоре в епидермиса, разширение към подкожната, еозинофилни глобули, митотични фигури и тяхното повърхностно или дълбоко разположение в тумора, гигантски клетки, наличие на улцерация и промени в стромата. 2, 3, 4, 5 В допълнение, повечето лезии не показват много от конвенционалните критерии, които обикновено се използват за хистопатологичната диагноза на тумора, което подчертава липсата на обективни критерии за прогнозиране на биологичното поведение на тези лезии. 3, 6, 7 Класификацията на някои случаи като Spitz nevi 1 метастази илюстрира трудността при точното разграничаване на някои Spitz невуси от меланома въз основа единствено на хистологични критерии. Следователно, диагностичният термин „атипичен тумор на Spitz“ се използва за описване на лезии, които се отклоняват от типичния вид на Spitz nevi и имат несигурно биологично значение. 7
Тъй като диагностиката на подгрупа от лезии остава трудна, целта на това проучване беше да се оцени експресията на голям панел от маркери, използвайки рутинни имунохистохимични методи, за да се осигури универсално достъпен набор от протеини за разграничаване между Spitz невус и невус. Меланом. Сравнихме сигнатурите за експресия на протеини и в двете серии от типични шпицови невоми и меланоми с вертикална фаза на растеж в опит да установим мощен инструмент, който позволява да се предскаже биологичното поведение на меланоцитните лезии. Резултатите предоставят набор от девет диференциално експресирани маркера при Spitz nevomas спрямо меланоми, полезни при диференциалната диагноза на двете меланоцитни лезии.
материали и методи
Изграждане на тъканни проби и тъканни матрици
Бяха проучени общо 90 проби, включени в парафин и фиксирани с формалин от архивите на Отделението по патология, болница Universitario 12 de Octubre, Мадрид, събрани между 1995 и 2005 г. Двадесет и осем съответстваха на типичните Spitz невуси, в съответствие с характеристики на вретеното и/или епителиоидните гнезда на меланоцити, размер 3 и 62 не-шпицоидни меланоми във фаза на първичен вертикален растеж. Вертикалната фаза на растеж беше дефинирана съгласно предварително установени критерии: 8 всички гнезда на туморни клетки в епидермиса са по-малки от поне едно в дермата, наличието на гнезда на дермални туморни клетки с ширина 25 или повече клетки и митотична активност в интрадермалните неопластични клетки . Пациентите с меланом са лекувани по стандартни критерии: хирургична резекция с адекватни граници. При клинични показания са използвани адювантни интерферонови или химиотерапевтични терапии за метастатично заболяване.
Представителните оцветени с хематоксилин-еозин срези бяха оценени за хистологичните характеристики на авторите и бяха избрани блокове въз основа на адекватна тъкан (с дебелина най-малко 1 mm) 9 за изграждане на тъканните матрици.
Тъканен микрочип, съдържащ Spitz nevi и още два с VGP меланоми, бяха сглобени, както е описано по-горе, 9, включително поне две отливки с диаметър 1,5 mm на силно клетъчни области на първичните парафинови блокове. Освен това нормални тъкани (предимно реактивни лимфни възли, сливици и кожа) бяха поставени върху решетките като вътрешен контрол.
Имунохистохимична система и точкуване.
Имунохистохимично оцветяване се извършва върху 3 µm тъканни участъци от блоковете тъканни микрочипове, като се използват 22 различни първични антитела срещу биологично значими протеини (източник и концентрация, изброени в таблица 1). Имунодетекцията се извършва със системата за визуализация LSAB или Envision (и двете от Dakocytomation, Glostrup, Дания) като се използва диаминобензидин хромоген като субстрат. Всички секции бяха оцветени с противоток с хематоксилин (DAKO).
Таблица в пълен размер
Отрицателните контроли се получават чрез пропускане на първичното антитяло. Изборът на прагове и вътрешният контрол за антителата са установени преди това, за да се улесни възпроизводимостта на метода съгласно публикуваната литература 9 (вж. Таблица 1). Всички случаи са оценени независимо от двама патолози и са записани като положителни, като се вземе предвид експресията на протеина в неопластичните клетки и специфичната граница за всеки маркер. Всички несъответствия в процента на положителните клетки бяха разрешени чрез едновременна преоценка на секциите.
Статистически анализ
Точният тест на Fisher беше използван, за да се оцени дали специфична експресия на протеин е свързана с дадена лезия, било то Spitz невус или меланом. Статистическата значимост беше заключена за р 10 стойности, за да се избегне влиянието на множество тестове. Клиничните и хистопатологичните данни са съставени след извършване на всички статистически проучвания (Таблица 2).
Таблица в пълен размер
Резултати
Клинични и хистопатологични характеристики.
Серията включва 90 пациенти (52% жени и 48% мъже) на възраст от 3 до 91 години. Средната възраст на пациентите с Spitz nevi и меланом е съответно 21,6 и 62 години. Местоположението на лезиите е известно в 71 от 90 случая (79%), като най-често срещаните крайници за Spitz nevi (46%) и стволът на меланомите (31%). Всички пациенти с Spitz невуси са живи без метастази, докато 56% (35 от 62) от вертикално растящите меланоми са развили метастази и 34% (21 от 62) са починали.
Повечето случаи на Spitz nevi показват епителиоидни или вретенови меланоцити без значителна цитологична атипия (Фигура 1). Не са наблюдавани митотични фигури или разширения на пагетоид в нито един от 28-те случая на Spitz nevu. Хистологичното изследване на меланомите (Фигура 2) разкрива, че най-често срещаният подтип на меланома, според Класификацията на меланома на Световната здравна организация, е повърхностно разпространяващият се меланом (29 от 62 случая, 47%). Двадесет и един от 62-те случая на меланом (34%) са разязвени и 69% (43 от 62 случая) имат индекс на Бреслоу> 1 mm. Повечето от тях са показали метастази, когато са били диагностицирани (35 от 62 случая, 56%). Таблица 2 обобщава клиничните и хистопатологичните данни от тази серия.
Два цилиндъра от типични Spit nevu (H&E; оригинално увеличение: × 100 ( да се, б ) и × 400 ( ° С, д )).
Изображение в пълен размер
Два цилиндъра с първични меланоми от VGP (H&E; оригинално увеличение: × 100 ( да се, б ) и × 400 ( ° С, д )).
Изображение в пълен размер
Експресионен профил при Spitz Nevi и меланом
Резултатите от експресията на протеини в Spitz невуси и меланом са подробно описани в Таблици 3 и 4 и са илюстрирани на Фигура 3. Имунооцветяването за специфични меланоцитни маркери показва положителност на S-100 във всички случаи, експресия на melan -A в повечето Spitz невуси ( 96%) и меланоми (92%), докато HMB-45 се изразява само при 44%, 12 от 27 случая на Spitz nevi в сравнение с 95% (59 от 62) при меланом.
Таблица в пълен размер
Таблица в пълен размер
Представително имунохистохимично оцветяване във VGP меланоми и Spitz nevu за значими протеини, включително p21 ( да се - д ), оцевин ( и - з ) и кавеолин ( i - л ) (оригинално увеличение: × 100 и × 400).
Изображение в пълен размер
По отношение на регулаторите на клетъчния цикъл, циклин D1 показва високи нива на експресия в Spitz nevu (17 от 23, 74%) и значително намалява при меланомите от първичната вертикална фаза на растеж (10 от 61, 16%). Не са открити значителни промени в p16, p53 или Rb, докато значително по-висока ядрена положителност за p21 се наблюдава при повечето новообразувания на Spitz (91%, 21 от 23) в сравнение със злокачествените тумори, при които p21 се изразява само в 27% 17 от 62) от случаите (Фигура 3).
Пролиферативната активност беше оценена с помощта на Ki-67 и топоизомераза II α имунооцветители. Spitz nevi показаха значително по-нисък процент на Ki-67 и топоизомераза α, тъй като имаше много малко положително оцветяване на клетките (11 показаха значителна свръхекспресия в Spitz nevi (25 от 26, 96%). И двата маркера) в сравнение с меланомите ( 23 от 53, 43% и 26 от 54, 48%, съответно).
Дискусия
Напоследък изглежда, че сравнителната геномна хибридизация и флуоресцентната in situ хибридизация в лезионните тъкани представляват полезни допълнителни техники в трудни случаи на спицоидни меланоцитни новообразувания, 16, 17, 18, 19, 20, 21, въпреки че тези молекулярни техники с висока разделителна способност все още не са Те са широко достъпни и понякога са трудни за тълкуване. Следователно са необходими повече изследвания, за да се оценят тези техники като диагностични инструменти. Хистопатологичното изследване остава златният стандарт за разграничаване на шпицовите невуси от меланома, въпреки че няма обективни критерии за прогнозиране на биологичното поведение на конкретна лезия. Преди това няколко проучвания, базирани най-вече на експресията на единични или малко протеини, са се опитали да хвърлят светлина върху многогодишните противоречия около спитоидните лезии 5, 15, 22, 23, но все още не са известни маркери, които да разграничават надеждно двете неоплазми. Следователно нито HMB-45, AgNOR, циклин D1, c-myc, c-fos, теломераза, cdc-7, антилептинов рецептор, BCL-2, p53 или p16 не са показани като полезни при разграничаването на Spitz nevi от меланома . 13, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33
В това проучване направихме сравнителен анализ на протеиновата експресия, използвайки широк панел от антитела между класически невуси на Spitz и меланоми с вертикална фаза на растеж. Използвайки анализ на тъканни микрочипове, високопроизводителна среда, която дава възможност за оценка на различни маркери при голям брой меланоцитни тумори, ние идентифицирахме специфичен профил на експресия на протеин, който разграничава типичен Spitz невус и не-spitzoid меланом (Таблица 2).
За разлика от меланома, свръхекспресията на циклин D1, наблюдавана в Spitz nevi, изглежда не е свързана с клетъчна пролиферация. Следователно, както беше отбелязано по-рано, Ki-67, ядрен антиген, свързан с клетъчния цикъл, ядрен сурвивин, митотичен регулатор, който запазва стабилността на микротубулите 38 и топоизомераза II α, изразен изключително в пролифериращите отделения на тумори и нормални тъкани, 39 са Значително увеличение на меланома спрямо невус. 8, 40, 41, 42, 43 Въпреки че меланомите показват по-високи нива на пролиферация (37 срещу 0% в Spitz nevi), когато се оценяват с Ki-67, малко случаи на Spitz nevi показват разпръснати положителни клетки в горната част на лезията, докато меланомът има ядрено маркиране по време на лезията. 41, 42
Структурният скелетен протеин кавеолин, с допълнителна роля в трансдукцията на сигнала на плазмената мембрана, показва загуба на експресия при меланоми във вертикална фаза на растеж в сравнение с невуси. Тези резултати са в съответствие с предишни доклади 9 и подкрепят намаляването на тяхната експресия и образуването на кавеоли в онкогенно трансформирани клетки. 44
Освен това, някои от протеиновите маркери, включени в нашето проучване, преди това са показали, че участват в медиирането на взаимодействията между клетки и матрикс и са замесени в меланома инвазия и прогресия. 11 Това проучване също така разкрива висока експресия на серин/треонин киназа PKC α и киселинния и богат на цистеин протеин остеонектин/SPARC в Spitz nevu (96% за двата протеина) и статистически значима разлика в сравнение с меланомите (48 и 43%, съответно; p 11, 45 Тези наблюдения главно предполагат, че дълбоката дерма инвазия не е непременно свързана със злокачествено заболяване и те идентифицират два нови маркера, които могат да се използват за разграничаване на меланомите от Spitz nevi.
Нито едно от тези открития не е достатъчно, за да изключи диагнозата меланом, но изглежда комбинацията от панел за експресия на протеин, който включва циклин D1, p21, остеонектин (SPARC), PKC α, Ki-67, topoII α и сурвивин може да има голямо диагностично приложение при разграничаването на типичен Spitz невус от неговите злокачествени миметици. Значително различната експресия, наблюдавана в Spitz невуси и меланоми за някои протеини, ще показва използването на панел за експресия на множество маркери в диференциалната диагноза (Таблица 3). По-специално, по-високата експресия на циклин D1, p21, остеонектин (SPARC) и PKC α и по-ниската експресия на Ki-67, topoII α и сурвивин са силно свързани с доброкачественото поведение.
В обобщение, демонстрирахме възможността рутинна техника като имунохистохимия да помогне да се разграничи невусът на Spitz от меланома. Въпреки това, по-големи проучвания, включително атипични тумори на Spitz, лезии, които се отклоняват от типичния вид на Spitz nevu и имат несигурно биологично поведение 7 с дългосрочно проследяване, и spitzoid меланоми изглежда са задължителни за потвърждаване и изграждане на полезен и ценен панел от експресия на маркер в класификацията на меланоцитни лезии.