Нефрологията е официалното издание на Испанското общество по нефрология. Списанието публикува статии за основни или клинични изследвания, свързани с нефрологията, високото кръвно налягане, диализата и бъбречната трансплантация. Списанието следва разпоредбите на системата за партньорска проверка, така че всички оригинални статии се оценяват както от комисията, така и от външни рецензенти. Списанието приема статии, написани на испански или английски език. Нефрологията следва стандартите за публикуване на Международния комитет на редакторите на медицински вестници (ICMJE) и Комитета по етична публикация (COPE).
Индексирано в:
MEDLINE, EMBASE, IME, IBEC, Scopus и SCIE/JCR
Следвай ни в:
Импакт факторът измерва средния брой цитати, получени за една година за произведения, публикувани в публикацията през предходните две години.
CiteScore измерва средния брой цитати, получени за публикувана статия. Прочетете още
SJR е престижна метрика, базирана на идеята, че всички цитати не са равни. SJR използва алгоритъм, подобен на ранга на страницата на Google; е количествена и качествена мярка за въздействието на дадена публикация.
SNIP дава възможност за сравнение на въздействието на списанията от различни предметни области, коригирайки разликите в вероятността да бъдат цитирани, които съществуват между списанията на различни теми.
- Обобщение
- Ключови думи
- Резюме
- Ключови думи
- Въведение
- Обобщение
- Ключови думи
- Резюме
- Ключови думи
- Въведение
- материали и методи
- Животински модел и определяния
- Лечение с уремични токсини и определяне
- Статистически анализ
- Резултати
- Мишките на диета, богата на аденин, развиват едновременно хронично бъбречно заболяване и съдови увреждания
- Уремичните токсини индуцират експресията на извънклетъчни матрични протеини и профибротичния цитокин tgf-β1 от haosmc клетки
- Дискусия
- Завършеност
- Финансиране
- Авторство
- Конфликт на интереси
- Библиография
Пациентите с хронично бъбречно заболяване имат натрупване на уремични токсини, които са идентифицирани като патогенни агенти, свързани със сърдечно-съдовата смъртност, което е много високо при тази група пациенти. Често срещано явление за прогресираща бъбречна дисфункция и свързано с нея съдово увреждане е необичайното натрупване на протеини на извънклетъчния матрикс (ECM) в бъбречни или съдови структури.
Изследване на приноса на уремия или уремични токсини за производството на цитокини и ECM в аортите на уремичните животни или гладките мускулни клетки на човешката аорта (HAOSMC).
Материали и методи
Използвани са мишки с уремия, индуцирани от диета, богата на аденин (0,2%) в продължение на 2, 4 или 6 седмици. Бъбречната функция се оценява чрез диуреза, плазмени нива на креатинин и плазмен уреен азот и фракционна екскреция на натрий и съдови увреждания чрез хистология и експресия на протеин чрез RT-qPCR. In vitro HAOSMC се инкубират с уремични токсини: р-крезол 10-100 (µg/ml) и индоксил сулфат 25-100 (µg/ml), самостоятелно или едновременно. Експресията на протеин се оценява чрез Western blot и конфокална микроскопия.
Прилагането на аденин води до прогресивно увреждане на бъбреците при мишки, удебеляване на аортната стена и повишена експресия на TGF-β1 и ECM протеини. Токсините с висока и комбинирана доза също индуцират експресия на TGF-β1 и ECM протеини от HAOSMC клетки.
Уремията, произведена чрез диета, богата на аденин или високи дози уремични токсини, индуцира анормалното отлагане на ECM протеини в съдовите стени или тяхното производство от HAOSMC. Разбирането на механизмите, залегнали в основата на този патофизиологичен процес, може да бъде полезно за предотвратяване на сърдечно-съдови увреждания, свързани с прогресирането на хронично бъбречно заболяване, състояние, което засега е необратимо и, понякога, безшумно до диагностицирането му в напреднали стадии.
Пациентите с хронично бъбречно заболяване имат натрупване на уремични токсини, които са идентифицирани като патогенни агенти, свързани със сърдечно-съдовата смъртност, което е много високо при тази група пациенти. Често срещано явление за прогресиращата бъбречна дисфункция и свързаното с нея съдово увреждане е анормалното натрупване на протеини на извънклетъчния матрикс (ECM) в бъбречните или съдовите структури.
За определяне на приноса на уремия или уремичните токсини за производството на цитокинини и ECM в аортите на уремични животни или човешки аортни гладкомускулни клетки (HASMC).
Материали и методи
Мишките бяха използвани с уремия, предизвикана от диета, богата на аденин (0.2%) в продължение на 2, 4 или 6 седмици. Бъбречната функция се оценява чрез обем на урината, плазмени нива на креатинин, урея, фракционна екскреция на натрий и съдови увреждания, като се използва хистология, както и експресия на протеин с помощта на RT-qPCR. HASMC се инкубират in vitro с уремични токсини: р-крезол 10-100 (μg/ml) и индоксил-сулфат25-100 (μg/ml) самостоятелно или едновременно. Експресията на протеин се оценява с помощта на Western blot и конфокална микроскопия.
Прилагането на аденин води до прогресивно увреждане на бъбреците при мишките, удебеляване на аортната стена и увеличаване на експресията на TGF-β1 и ECM протеини. Токсините във високи дози и комбинирани също индуцират експресията на TGF-β1 и ECM протеини от HASMCs.
Уремията, произведена от богата на аденин диета или високи дози уремични токсини, индуцира анормалното отлагане на ECM протеини в съдовата стена или нейното производство от HASMC. Разбирането на механизмите, които са в основата на този патофизиологичен процес, може да бъде полезно за предотвратяване на сърдечно-съдови увреждания, свързани с развитието на хронично бъбречно заболяване, заболяване, в момента, което е необратимо и от време на време мълчи до диагностицирането му в напреднали стадии.
Целта на тази работа е да задълбочи изследването на приноса на токсини, които се натрупват в серума на уремични пациенти, за съдови увреждания и по-специално за необичайно отлагане на ECM в съдовата тъкан. За това използвахме животински модел на прогресивна ХБН, чрез прилагане на диета, богата на аденин, или инкубация на човешки аортни гладкомускулни клетки (HAOSMC) с уремични токсини.
Материал и методи Животински модел и определяния
Плазмените и пикочните метаболити се определят с търговски комплекти, в съответствие с инструкциите на производителя: креатинин и плазмен уреен азот (Arbor Assays LLC, Ann Arbor, MI, САЩ). За изчисляване на фракционната екскреция на натрий е използвана плазма и концентрация на натриеви йони в урината (Sodium Assay Kit, Abcam, Cambridge, UK). Спектрофотометричните определяния бяха извършени с мултимодовия четец на Victor X4 (PerkinElmer, Waltham, MA, САЩ).
Лечение с уремични токсини и определяне
HAOSMC са получени чрез ензимна дисоциация на аортата на 5 донори на органи, в съответствие с испанските законови разпоредби, с одобрението на Комитета по етика на болница Universitario de Getafe, както беше описано по-рано 15, и бяха щедро дарени от д-р Санчес-Ферер . Клетките се поддържат в DMEM хранителна среда, допълнена с 10% телешки серум, L-глутамин, амфотерицин, пеницилин и стрептомицин. За експериментите HAOSMC, от пасажи 3 до 10, се култивира с човешки серум (AB серум; BioWhittaker, Walkersville, MD, САЩ) при 2,5% в продължение на 24 часа и се инкубира с уремичните разтворени р-крезол (pc) и IS (Sigma), използвана при концентрации в уремичния диапазон: IS 25 и 100 μg/ml и pc 10 и 100 μg/ml, самостоятелно или едновременно при ниски и високи концентрации (IS + pc), за променливи времена.
След леченията съдържанието на клетъчен протеин се определя чрез конвенционален Western blot 16 с първични антитела срещу TGF-β1, колаген I или фибронектин (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, САЩ) или TGF-β1 чрез имунофлуоресценция, с конфокален микроскоп Leica 17. .
Всички данни бяха анализирани със софтуера GraphPad Prism. Резултатите се изразяват като средната стойност ± SEM. Тъй като броят на животните или експериментите никога не е бил по-голям от 10, бяха направени сравнения с непараметрична статистика, като се използва тестът на Крускал-Уолис с Ман-Уитни след тест (несдвоени данни) или тест на Фридман с пост-тест на Уилкоксън (сдвоени) данни). Стойност от р 0,05 се счита за значима.
Резултати Мишките на диета, богата на аденин, развиват едновременно хронично бъбречно заболяване и съдови увреждания
Сравнителен анализ на бъбречната функция между контролните животни и тези, хранени с аденин.
| Диуреза (μl/24 часа) | ||||
| Контрол | 432 ± 49 | 421 ± 52 | 445 ± 48 | 439 ± 48 |
| Аденин | 431 ± 56 | 3 968 ± 524 *, ** | 6,382 ± 615 *, ** | 6,115 ± 627 *, ** |
| Плазмен креатинин (mg/dl) | ||||
| Контрол | 0,28 ± 0,07 | 0,26 ± 0,1 | 0,31 ± 0,06 | 0,25 ± 0,02 |
| Аденин | 0,29 ± 0,06 | 0,63 ± 0,13 *, ** | 0,70 ± 0,12 *, ** | 0,86 ± 0,07 *, ** |
| Плазмен уреен азот (mg/dl) | ||||
| Контрол | 24 ± 2 | 23, ± 4 | 26 ± 4 | 24 ± 2 |
| Аденин | 27 ± 4 | 86 ± 20 *, ** | 109 ± 23 *, ** | 126 ± 8 *, ** |
| Фракционна екскреция на натрий (%) | ||||
| Контрол | 0,44 ± 0,03 | 0,42 ± 0,02 | 0,43 ± 0,03 | 0,38 ± 0,06 |
| Аденин | 0,45 ± 0,02 | 1,07 ± 0,28 *, ** | 1,09 ± 0,21 *, ** | 1,63 ± 0,49 *, ** |
Мишките са хранени със стандартна диета (Control) или диета, богата на аденин (Adenine), в продължение на 2, 4 или 6 седмици. Бъбречната функция се определя чрез измерване на диуреза, плазмен креатинин, плазмени нива на азот в урея и фракционна екскреция на натрий. Стойностите са представени като средната стойност ± SEM.
р 0,05 срещу седмица 0.
р 0,05 срещу Контрол едновременно с лечението. n = 5 животни/група.
Мишките с ХБН, индуцирани от диета, богата на аденин, развиват съдови структурни увреждания. Мишките са хранени в продължение на 6 седмици или със стандартната диета (Control), или с диета, богата на аденин (Adenine). А) Аортите се оцветяват с хематоксилин-еозин. Показани са представителни промени. При контролните мишки не се наблюдават лезии. Обърнете внимание на удебеляването на средата (звездичка) в аортите на адениновите мишки. Скала: 100 μm. Увеличение × 20. Б) Морфометричен анализ на дебелината на средната стойност и радиуса на светлината, извършен с помощта на софтуера ImageJ и изчисляване на неговото съотношение. Средният радиус се счита за средната стойност на 5 независими измервания в различни посоки. Стойностите са представени като средната стойност ± SEM. 1 p 0,05 срещу Контрол. n = 5 животни/група.
Мишки с ХБН, индуцирани от диета, богата на аденин, показват повишена експресия на профибротичния цитокин TGF-β1 и гените на извънклетъчната матрица в аортата. Мишките са хранени в продължение на 2, 4 или 6 седмици или със стандартната диета (Контрол, черни кръгове), или с диета, богата на аденин (Аденин, черни триъгълници). Нивата на TGF-β1 (A), колаген i (COL I, B) или фибронектин (C) тРНК в аортата се определят чрез RT-qPCR. Общите нива на β-актин бяха определени като съответните им ендогенни контроли. Стойностите са представени като средната стойност ± SEM спрямо Контрол. * p 0,05 срещу 2 седмици, 1 р 0,05 срещу Контрол, едновременно с лечението. n = 5 животни/група.
Високите дози уремични токсини индуцират експресията на профибротичния цитокин TGF-β1 или протеините на извънклетъчната матрица в клетките на съдовите гладки мускули. Клетките на гладките мускули от човешката аорта се инкубират със среда, допълнена с 2,5% човешки серум в продължение на 24 часа. Впоследствие те бяха третирани в продължение на 2, 4, 6 или 24 часа (A, C и D) или 24 часа (B) с уремични токсини: индоксил сулфат (IS 100 μg/ml), паракрезол (pc 100 μg/ml ) или смес от двете (IS + pc 100 μg/ml). Показани са представителни западни петна от TGF-β1 (A), колаген i (COL I, C) и фибронектин (D). Нивата на GAPDH се определят като съответните им ендогенни контроли. Стълбовете представляват стойностите на денситометричния анализ на нормализираните петна спрямо ендогенния контрол. Експресията на TGF-β1 се анализира чрез имунофлуоресценция (В). Показани са представителни изображения на снимките, получени чрез конфокална микроскопия (× 100). Стойностите са представени като средната стойност ± SEM. * p 0,05 срещу Контрол (CT, необработени клетки).
Основните констатации на това проучване са, че уремията индуцира експресията на профибротичния цитокин TGF-β1 и натрупването на ECM протеини в аортите на мишки, при които прогресивната уремия е индуцирана от богат модел на администриране на диетата, и че уремичните токсини индуцират експресията на същите тези протеини в HAOSMC клетки.
И накрая, използваните концентрации на токсини в това проучване са в рамките на отчетените за уремични пациенти (1-100 μg/ml) 28, като могат да достигнат общи стойности в серума от 236 и 105 μg/ml за IS и p-CS съответно при пациенти на хемодиализа 28 и по-малко от 4,9 и 46 μg/ml за IS и p-CS, съответно при пациенти с ХБН, които не са на диализа, за които има много малко информация. Освен това са наблюдавани високи нива на двата токсина при пациенти с 1-5 стадии на ХБН, когато прогресивните vs. непрогресиращи 16. Нашите резултати, както in vitro, така и in vivo, показват, че при по-високите дози или понякога след 4 седмици аденин има значително увеличение в производството и/или натрупването на ECM протеини.
В настоящата работа е демонстрирано за първи път, че уремичните токсини, които се натрупват при пациенти с краен стадий на ХБН, индуцират експресията на цитокин TGF-β1 и ECM протеини от HAOSMC, което може да обясни механизма, чрез който съдовите увреждания и ECM се наблюдава натрупване in vivo в модела на прогресивна ХБН, индуцирана от диета, богата на аденин.
Тази работа е финансирана от здравен институт Карлос III (ISCIII) и фондове FEDER (PI14/02075, PI17/00625, PI17/01513), фондове FEDER и програми ISCIII RETIC REDinREN (RD12/0021/0006 и RD16/0009/0018 ), Автономна общност в Мадрид (NOVELREN-CM REF: B2017/BMD-3751), Университет в Алкала (CCG2016/BIO-043) и фондация Senefro (Senefro-2016) към LCB, и фондация Iñigo Álvarez de Toledo Renal ( FRIAT).
Диего Родригес-Пуйол и Лора Калерос споделят насоката на тази работа.
Конфликт на интереси
Авторите декларират, че нямат конфликт на интереси.
- Как да изберем диета при бъбречни заболявания
- Диети с високо съдържание на протеини и бъбречни заболявания повече доказателства за очевидното
- Контрол на обема и хипертрофия на лявата камера при пациенти с краен стадий на бъбречно заболяване
- Как мога да предотвратя хронично бъбречно заболяване Пациент в класната стая Версия за печат
- Високо протеинови диети и бъбречни заболявания повече доказателства за очевидното - Диетологът на