UniversidaddeExtremadura факултет на науките отдел ofBiomedical науките Площ ofMicrobiology докторска дисертация Идентификация и функционален анализ на гени, участващи в dischargingomycescerevisiarevised phosphorylationdenoligosaccharides Представени paraoptaralDegree ofDoctorby: IsaacCorbachoCuello Badajozni, 25thAdvancedProgramme ofNaturalism и BiologyCorbachoCorbachoCuello Бадахос, 25thAdvancedNovember2008Department ofNaturalism и BiologyAdvancedNovember2008Development ofNaturalism и BiologyAdvancedNovember2008Development ofNaturalism и BiologyAdvancedNovember2008Dept.

факултет

Редактиран от: Университет на Естремадура Калдерерос Публикация 2. Трети етаж Касерес 10071 Имейл: [email protected] http://www.unex.es/publicaciones

Universidad de Extremadura ОТДЕЛ ЗА ЕАНАТОМИЯ, КЛЕТОВА БИОЛОГИЯ И ЗООЛОГИЯ Факултет по биология Факултет Avda.deElvass/n 06071 Бадахос д-р Гервасио Мартин Партидо, директор на катедра по анатомия, клетъчна биология и зоология в Университета на Естремадура, отговорен за програмата PhD Докторски проучвания на организми: озаглавен: Идентифициране и функционален анализ на гените на Saccharomyces cerevisiae, участващи във фосфорилирането на N олигозахариди, представени от cord.isaaccorbachocollo за избор на професорска степен, е проведено под ръководството на Dr.Luism.hernándezmartín и Dra Изабел Оливеро Хименес, в Департамента по биомедицински науки на Страната на баските, в Департамента по биомедицински науки в Страната на баските, в следващата област на биомедицинските науки, в Департамента по биомедицински науки на Съединените американски щати и следващия Биомедицински университет., 30 юни 2008 г. Подписано: GervasioMartínParty директор на отдел по анатомия, клетъчна биология и зоология

Университет Екстремадура DEPARTAMENTODECIENCIASBIOMÉDICAS ÁREADEMICROBIOLOGÍA FacultaddeCiencias EdificioJuanRemónCamacho Avda.deElvass/п 06071Badajoz Лекарите Луис М. Hernandez Martin и Isabel Olivero Jimenez, ProfesoresTitularesdelDepartamentodeCienciasBiomédicasdelaUniversidad deextremadura удостоверяват QueellicenciadoD.IsaacCorbachoCuelloharealizadoeltrabajotitulado идентификация и функционален анализ на гени на Saccharomyces Cerevisiae, участващи в фосфорилирането на Noligosacáridos под неговата посока, в катедрата по биомедицински науки (зона за микробиология) на Университета в Естремадура, за да изберат докторска степен. И за да упълномощят тяхното представяне и оценка от съответния съд, те подписват това удостоверение в Бадахос, 30 юни 2008 г. Подписано: LuisM.HernándezMartín Професор Началник на катедрата по биомедицински науки Подписано: IsabelOliveroJiménez професор от катедрата по биомедицински науки

Съкращения P фосфат PAGE Electroforesisengeldepoliacrilamida (PolyacrylamideGelElectrophoresis) т.к. Pardebases PCR Reacciónencadenadelapolimerasa (polymerasechainreaction) Pi Fostatoinorgánico РКС VíadetransduccióndeseñalesmediadaporPkc1p PMSF Fluorurodefenilmetilsulfonilo Pro Пролин PVC Compartimentoprevacuolar (prevacuolarcompartment) RE ендоплазмения ретикулум SDS Dodecilsulfatodesodio SDS-PAGE Electroforesisengeldepoliacrilamidaencondicionesdesnaturalizantes (SDS PolyacrylamideGelElectrophoresis) Ser Серин SGD BasededatosdelgenomadeSaccharomycescerevisiae (SaccharomycesGenomeDatabase) TEMED тетраметилетилендиамин TFN Ácidotrifluoroacético Thr Треонин (треонин) Tm Температура на топене Трис Тришидроксиметиламинометан UDP Уридиндифосфат VATPase H + ATPвакуоларна мембрана пасаж VPS Гени, свързани с транспортирането на протеини до вакуола (вакуоларно вливане на протеин) VRГензилиране и свързана с тях глилационна устойчивост и устойчивост мутанти) 6

Въведение Фигура 0.3. Схематично обобщение на различните етапи в биосинтеза на нолигозахарида в ендоплазмения ретикулум. Синтезът на олигозахарид започва с прехвърлянето на N ацетилглюкозамин фосфат от свързан уридин фосфат (UDP) NAcGlc към долихол фосфат дандолугаранакраглкппдол. Там се добавят още четири манози и три глюкози според определена последователност от реакции, означава серия от специфични гликозилтрансферази. Тези трансферази са кодирани от genesalg (asparraginelinkedglycosylation), чиито дейности са посочени на фигурата.Трансмембранната транслокация на хептазахарид, свързан с полихол, не е известна в детайли от биохимична гледна точка; при дрождите е известно, че продуктът на жанр, 2002, вече е необходим. (2002). единадесет

Въвеждане на нетен отрицателен заряд на клетъчната повърхност, което би могло да представлява предимство в някои среди, но не е възможно да се установи напълно точната функция на тези групи по биосинтетичен път (jigamiyodani, 1999). Фигура 0.5. Разположение на манозилфосфатни групи в нолигозахариди и оолигозахариди. Акцепторните последователности на манозилфосфат са обозначени в зелено и червено. Ballou и неговите сътрудници проведоха първите проучвания за трансфера на мананови фосфатни групи в нолигозахариди преди 30 години, изолирайки два безусловни мутанта с дефект на манан mnn4 (Ballou et al., 1973; Raschke et al., 1973) и mnn6 (Karson and Ballou, 1978), който показва пълно отсъствие на фосфатни групи в олигозахаридите, свързани с манопротеини. В допълнение, те създадоха метод за измерване на активността на манозилтрансферазата (Karson and Ballou, 1978) и установиха пряка връзка между съдържанието на фосфати и афинитета на клетката към катионното алканово синьо багрило (Ballou et al., 1973; Raschkeetal., 1973 ).