Ефекти на хранителните липиди върху съдовата контракция на гладката мускулатура и концентрацията на производни на азотен оксид в плазмата на плъхове

Канделария Алфонсо-Перес 1, Холгер Ортис 2, Мигел Родригес 3, Хуан Де Санктис 4

1 професори добавени. Секция за сърдечно-бъбречни изследвания, Институт по експериментална медицина, Медицински факултет. UCV

2 доцент. Катедра по биохимия, Училище за медицински сестри, Медицински факултет, UCV. Възложено на Института по експериментална медицина

3 доцент, катедра по фармакология, училище „Луис Разети“. Медицински факултет

4 доцент. Институт по имунология, Медицински факултет. UCV

Институт по експериментална медицина, Медицински факултет, Централен университет на Венецуела

Канделария Алфонсо. Институт по експериментална медицина, Секция за сърдечно-бъбречни изследвания. Медицински факултет. UCV. [email protected]. Няма налични препечатки.

Признание: Тази работа е финансирана частично от CDCH-UCV чрез проекти № 09.33.5385.04 и 09.00.5704.04

Определихме ефекта на хранителните липиди върху свиването на аортните пръстени и върху концентрацията на NO производни? в плазмата. Мъжките плъхове Sprague-Dawley са хранени в продължение на 6 седмици с една от трите диети: ратарин, ратарин плюс 5% соево масло или ратарин плюс 5% палмов олеин + соево масло. Гръдните аортни пръстени се фиксират в суперфузионна баня и процентът на силата на свиване се определя при увеличаване на дозите норепинефрин (1 х 10 -10 до 1 х 10 -5 М). Нитритите, нитратите и нитротирозинът са анализирани като производни на NO ?. Диетата с олеин + соя имаше най-висок процент на C18: 1, n-9 мастна киселина и групата, която я погълна, имаше най-нисък процент на сила на свиване, най-висока концентрация на нитротирозин и най-ниска концентрация на нитрати в плазмата (p

Ключови думи: Олеин, аорта, нитротирозин, плъх

Определихме ефекта от липидната диета при свиване на аортния пръстен и NO ? производни в плазмата. Мъжки плъхове Sprague-Dawley са били хранени в продължение на 6 седмици с една от 3-те диети: чау-чау, чау-чау повече 5% соево масло или чау-чау повече 5% олеинова палма + соево масло. Определят се аортният гръден пръстен, залепен при суперфузионна баня, и процент от силата на свиване при различни дози от норепинефрин (1 х 10 -10 до 1 х 10 - 5 М). НЕ ? анализирани производни са нитрит, нитрат и нитротирозин. Диетата с олеин + соя представя по-големия процент на мастната киселина C18: 1, n-9. Консумираното от олеин + соево масло намалява процента на силата на свиване на аортата в гръдния кош, увеличава концентрацията на нитротирозин и намалява концентрацията на нитрати в плазмата (p

Ключови думи: олеин, аорта, нитротирозин, плъх

Въведение

В артериалната стена свободните радикали на кислорода се произвеждат в гладкомускулните клетки и фибробластите в отговор на ангиотензин II, който стимулира мембранната и ендотелната NADPH оксидазна активност. Фридович през 1978 г. посочи, че кислородните радикали произхождат от производството на O2 ? 8. Високо производство на O2 ? инактивира NO ?, тъй като при реакция те произвеждат ONOO-9, който чрез увеличаване на концентрацията си нитрифицира интегралните и разтворими протеини, във въглерода 3 на ароматния пръстен на остатъците от L-тирозин, близо до глутамат, намиращ се във външната структура на протеини, образуващи нитротирозин 10 .

Целта на тази работа е да се оцени въздействието на диети, обогатени с олеин + соя или соеви масла върху силата на свиване при нарастващи дози норепинефрин в аортата на плъхове, както и върху производството на нитротирозин, вещество, свързано с процесите възпалителни.

Концентрацията на нитротирозин в плазмата се определя с помощта на сандвич ELISA тест 13. Концентрацията на нитрит се определя с помощта на колориметричния метод на Griess с малки модификации 14. Нитратите се редуцират до нитрити с помощта на ензима нитрат редуктаза, за да се приложи след това модифицираният метод на Griess 14 .

Процентът на мастните киселини се анализира чрез газово-течна хроматография, след екстракция на липидите с хлороформ-метанол в съотношение 2: 1 (v/v) и вода 15. Като антиоксидант бяха използвани 10 mg бутил-хидрокси-толуен (BHT)/100 ml разтворител. Липидите се трансестерифицират до метилови естери на мастни киселини, като се използват 5 ml от безводната смес метанол: толуен: сярна киселина в съотношение 90: 10: 1 (v: v: v) под обратен хладник при 80 ° С за 1 h. Метиловите естери се екстрахират с 5 ml хексан. Органичната фаза се измива с вода при 4 ° С и се филтрира върху хартия Whatman® номер 1. Метиловите естери на мастните киселини се анализират в хроматограф на Hewlett-Packard® модел 6890, с пламъчен детектор, 30 m х капилярна колона. 0,25 mm с INOWAX® 0,25 µm при 200 ° C. Подвижната фаза беше H2. Метиловите естери бяха идентифицирани, като се използва времето на задържане на стандартите Sigma®.

Таблица № 1 показва процента на мастните киселини в диетите, допълнени с 5% олеин + соя или соево масло и в групата без маслена добавка (контрол). Диетата с олеин + соя имаше по-висок процент палмитинова киселина (С16: 0) и олеинова киселина (С18: 1, n-9) в сравнение с диетата със соя (р

върху

Фигура № 1 показва процента на свиване на аортните пръстени на плъх в отговор на нарастваща доза норепинефрин. Аортните пръстени на групата олеин + соя показват по-нисък процент на свиване (p 1x10 -7 и 1x10 - 8 M в сравнение с контролните и соевите групи.

Фигура 1.- Крива доза-отговор към норепинефрин в аортни пръстени на плъхове с диети, допълнени с 5% от различни масла. N = 5 за всяка група. Средно ± SE. Аортните пръстени от групата олеин + соя показват по-нисък процент на свиване (стр

На фигура № 2 се наблюдава концентрацията на нитротирозин в плазмата на плъхове с диети, допълнени с 5% различни масла. Групата, допълнена с олеин + соево масло, показа значително увеличение (р 0,5) в концентрацията на нитрити.

Фигура 2.- Концентрация на нитротирозин в плазмата на плъхове с диети, допълнени с 5% различни масла. N = 5 за всяка група, средно ± SE.

Групата, допълнена с 5% олеин + соево масло, показа значителна разлика (стр

Препратки

1. Edirisnghe I McCormick hallam K, Kappagoda CT. Ефект на мастните киселини върху зависимата от ендотелия релаксация в аортата на заека. Clin Sci (Лондон) 2006; 111: 145-151 [Връзки]

2. Saraswathi V, Wu G, Toborek M, Hening B. Индуцирана от линолова киселина ендотелна активация: роля на сигнализирането на калций и пероксинитрит. J липиден Res. 2004; 45: 794-804 [Връзки]

3. Viner RI, Ferrington DA, Williams TD, Bigelow DJ, Schoneich C. Модификация на протеини по време на биологичното стареене: селективно тирозиново нитриране на de SERCA2a изоформа на саркоплазма ретикулум Ca 2+ -ATPase в скелетните мускули. Биохимичен J. 1999; 340: 657-669 [Връзки]

4. Han B, logsdon C. CCK стимулира експресията на mob-1 и активирането на NF-Kappa B чрез протеин киназа C и вътреклетъчна Ca 2+. Am J Physil.Cell Physiol.2000; C344-C351 [Връзки]

5. Райт JR, Lefkowith JB, Schreiner G, Lacy PE. Есенциалният дефицит на мастни киселини предотвратява множеството индуцирани от ниски дози стрептозотоцин диабет при CD-1 мишки. Proc Natl Acad Sci.1988; 85: 6137 - 6141 [Връзки]

6. Leifert WR, MC Murchie EJ, Saint DA. Инхибиране на сърдечните натриеви течения в миоцитите на възрастни плъхове от n-3 полиненаситени мастни киселини. J Physiol. 1999; 520: 671-679

7. Dubey RK Jackson EK, Luscher TF. Азотният оксид инхибира индуцираната от ангиотензин II миграция на гладкомускулни клетки на плъхове. J Clin invest 1995; 96: 141-149 [Връзки]

8. Фридович И. Биологията на кислородните радикали. Наука 1978; 201: 875-880 [Връзки]

9. Kooy N, Lewis S, Royall J, Ye Y, Nelly D, Beckman J. Екстензивно нитрозиране на тирозин при възпаление на миокарда при човека: доказателства за наличието на пероксинитрит. Crit Care Med.1997; 25: 812-819 [Връзки]

10. Zheng L, Nukuna B, Brennan ML, Sun M, Goormastic M, Settle M, Schmitt D, Fu X, Thomson L, Fox PL, Ischiropoulos H, Smith JD, Kinter M, Hazen SL. Аполипопротеин A-I е селективна цел за катализирано от миелопероксидазата окисление и функционално увреждане при пациенти със сърдечно-съдови заболявания. J Clin Invest. 2004; 114: 529-541 [Връзки]

11. Furchgott R. спирално изрязани ленти от аорта на заек за изследвания Vitro на отговорите на артериалния гладък мускул. Методи Med. Res. 1960; 8: 177-186 [Връзки]

12. Furchgott R. и Zawadzki. J. Задължителната роля на ендотелната клетка в релаксацията на артериалната гладка мускулатура от ацетилхолин. Природата. 1980; 288: 373-376 [Връзки]

13. Ye YZ, Strong M, Huang ZQ, Bekeman JS. Антитела, които разпознават нитротирозин. Методи Enzymol 1996; 269: 201-209 [Връзки]

14. Garmendia JV, Gutierrez Y, Blanca I, Bianco NE, De Sanctis JB. Азотен оксид при различни видове хипертония по време на бременност. Клинична наука. 1997; 93: 413-21 [Връзки]

15. Folch J, Lees M, Sloane GH. Прост метод за изолиране и пречистване на общите липиди от тъканите. J Biol Chem 1957; 266: 497-509 [Връзки]

16. Sundram K, Hayes KC, Siru OH. Диетичната палмитинова киселина води до по-нисък серумен холестерол, отколкото комбинацията от лауринова миристинова киселина при нормолипемични хора. Am J Clin Nutri. 1994; 59: 841-846 [Връзки]

17. Müller H, Kirkhus B и Pedersen J. Уравнения за прогнозиране на серумен холестерол със специален акцент върху транс и наситените мастни киселини. Анализ от проектирани контролирани проучвания. Липиди. 2001; 36: 783-791

18. Mc Cord JM, Fridovich I. Биологията и патологията на кислородните радикали. Ann Int med. 1978; 89: 122-127 [Връзки]

19. Goodfellow J, Bellamy MF MW, Jones CJ, Lewis MJ. Диетичните добавки с морски омега-3 мастни киселини подобряват системното насочване на ендотелната функция на артериите при пациенти с хипер холестеролемия. J Am Coll кардиол 2000; 35: 265-270 [Връзки]

20. Herrera MD, Pérez-Guerrero C, Marhuenda E, Ruíz-Gutierrez V. Ефекти на диетични масла, богати на олеин (необработена маслина и слънчоглед с висока олеинова киселина) върху съдовата реактивност при wistar-kyoto и спонтанно хипертонични плъхове. Бр. J Nutr 2001; 86: 349-357 [Връзки]

21. Tamai O, Matsuoka H, ​​Itabe H, Wada Y, Cono K, Imazumi T. Единичната LDL афереза ​​подобрява ендотел-зависимата вазодилатация при хора с хиперхолестеролемия. Тираж 1997; 95: 576-582 [Връзки]

22. Клебанов. Seymour J. Междинни продукти с реактивен азот и антимикробна активност: Роля на нитрита. Безплатна радикална биология и медицина. 1993; 14: 351-360 [Връзки]

23. Паркинсон JF, MitrovicB, Cerril JE. Ролята на азотния оксид при множествена склероза J Mol Med 1997; 75: 174-186 [Връзки]

24. Zabaleta ME, Bianco NE, De Santis Juan B. Нива на серумен нитротирозин при пациенти с множествена склероза: връзка с клиничната активност. 1998; 26: 407-408. [Връзки]

25. Hu FB, Stampfer MJ, Manson JE, Rimm E, Colditz GA, Rosner BA, Hennekens CH, Willett WC. Диетичният прием на мазнини и рискът от коронарна болест на сърцето при жените. N Engl J Med. 1997 337: 1491-1499 [Връзки]