изолиране

В
В 		В

Персонализирани услуги

Списание

  • SciELO Analytics
  • Google Scholar H5M5 ()

Член

  • Испански (pdf)
  • Статия в XML
  • Препратки към статии
  • Как да цитирам тази статия
  • SciELO Analytics
  • Автоматичен превод
  • Изпратете статия по имейл

Индикатори

  • Цитирано от SciELO

Свързани връзки

  • Подобно в SciELO
  • uBio

Дял

Перуански вестник по биология

версия В он-лайн В ISSN 1727-9933

Rev. peru biol.V vol.20V no.2В LimaВ август В 2013

ОРИГИНАЛНИ РАБОТИ

Изолиране и характеризиране на Ешерихия коли O157: H7 от говеждо месо в Лима-Перу

Изолиране и характеризиране на Ешерихия коли O157: H7 от месодайни говеда в Лима-Перу

2 Лаборатория по химия на храните, Факултет по биологични науки, Universidad Nacional Mayor от Сан Маркос.

Обобщение

Ключови думи: Ешерихия коли O157: H7, говеда, говеждо месо, фактори на вирулентност.

Резюме

Целта на изследването е да се изолира и характеризира Е. coli O157: H7 от прясно смляно говеждо месо, получено на различни пазари на храни. Анализирани са 195 проби, за изолиране и изброяване на Е. coli е използвана техника с най-вероятна бройка, използваща множество епруветки, за изолиране и характеризиране на Е. coli O157: Н7 селективно обогатяване и биохимичен анализ, характерни колонии са потвърдени серологично. За да се определи наличието на шигатоксин (stx1, stx2) и интимин (eaeA) беше направено с мултиплекс PCR в реално време и за ентерохемолизин тестът за хемолиза. 87,18% от пробите са положителни за Е. coli, а 77,95% имат брой, по-голям или равен на 50 NMP/g. Бяха получени 3 (1,54%) щама на E. coli O157: H7, един stx1 +/stx2 +/eaeA - и ентерохемолизин -, един stx1 +/stx2 -/eaeA + и ентерохемолизин - и другият stx1 -/stx2 -/eaeA - и ентерохемолизин +. Също така са получени 4 (2,05%) щама на Е. coli O157 non H7, без представени фактори на вирулентност. Проучването установи, че потенциалът за риск E. coli O157: H7 засяга населението на Лима.

Ключови думи: Ешерихия коли O157: H7, говеда, говеждо месо, фактори на вирулентност.

Въведение

Ентерохеморагичната EC подгрупа (EHEC) е най-агресивният серотип за хората и според СЗО, щам STEC, който се счита за EHEC, трябва да произвежда интимин и ентерохемолизин; Има повече от 150 серотипа, като най-често срещаният в световен мащаб е Е. coli 0157: H7.

В Перу първата находка на Е. coli O157: H7 е направена във изпражненията на бебе, дошло от Tacna, щамът представя 3-те фактора на вирулентност (Huapaya et al. 2001, Huguet et al. 2002). Мора и др. (2007) в проучване на 102 проби говеждо месо в столицата Лима, те откриха 22,55% (23) положителни за Е. coli O157; От общия брой положителни резултати са анализирани 10 (43,48%) щама, като се проверява дали всички са E. coli O157: H7, произвеждащи 03 вирулентни фактори.

Целта на това проучване е да се определи наличието на щамове на Е. coli O157: H7 в проби от прясно смляно говеждо месо от говеда, които се продават в различни области на Метрополитен Лима и да се определи наличието на фактори на вирулентност.

Между юни 2009 г. и януари 2011 г. бяха анализирани 195 проби прясно говеждо месо от едър рогат добитък, събрани в произволно избрани 65 щанда, разположени в 33 хранителни пазара, разположени в 17 района на столичния град Лима. Три проби бяха събрани на всяка станция, по една на всеки шест месеца. Месото се доставяше от три хладилника и две камери и беше готово за продажба на обществеността.

Щамът Е. coli ATCC 918026 се използва като положителна контрола, а Е. coli АТСС 25922 като отрицателна контрола.

Резултати

От 195 проби прясно смляно говеждо месо, 87,18% (170) са положителни за Escherichia coli, а 77,95% (152) имат брой, равен или по-голям от 50 MPN/g.

От общите проби 1,54% (03) представиха E. coli O157: H7; Те бяха наречени щамове CE 001, CE 002 и CE 003; трите изолата са получени от проби, събрани на пазари в областите Комас, Ла Виктория и Сан Хуан де Мирафлорес, съответно. Трите щама са имали колонии отрицателен сорбитол, отрицателна глюкориназа, положителна подвижност, положителен индол, отрицателен сероводород, отрицателен цитрат, положителна лизин декарбоксилаза и ферментация на глюкоза и лактоза. 2,05% (04) представиха E. coli O157, а не H7.

От Е. coli O157: Н7 щам CE 001 беше stx1 +/stx2 +/eaeA -/ентерохемолизин -; щам EC 002 беше stx1 +/stx2 -/eaeA +/ентерохемолизин -, а щам CE 003 беше stx1 -/stx2 -/eaeA -/ентерохемолизин +. От E. coli O157 не-H7 щамове, всички са отрицателни за фактори на вирулентност.

При мултиплексната PCR в реално време присъствието на stx1 и eaeA беше доказано в щам CE 002, чрез образуване на флуоресцентни пикове, генерирани от stx1 и eaeA гените; първият връх принадлежи на eaeA, а вторият на stx1 (фиг. 1). В случая на щама CE 001 бяха доказани пикът, генериран от гена stx1 и втори пик на флуоресценция, генериран от гена stx2 (Фиг. 2). В щам CE 003 се наблюдава ореол на хемолиза около културата (Фиг. 3).

Дискусия

В Лима, Мора и сътр. (2007) установяват високо разпространение (22,55%) в 102 проби от говеждо месо, всички анализирани щамове (10) са произвели 03 фактора на вирулентност; Rivera et al. (2012) откриват серотипа на E. coli O157 в 1,75% (02) от 114 проби говежди изпражнения, единият от щамовете произвежда stx1 и eaeA, а другият само stx1. Вземането на проби от Mora et al. се проведе между октомври 2000 г. и февруари 2001 г., това на Rivera et al. между ноември и декември 2010 г. и това на нашето проучване между юни 2009 г. и януари 2011 г. През последните 15 години не е имало огнища на болестта в Лима, така че може да се приеме, че това е временно разпространен серотип.

Благодаря

Цитирана литература

Barletta F., T. Ochoa, L. Ecker L, et al. 2009. Валидиране на анализ на пет колонии с помощта на мултиплексна PCR в реално време за откриване на диареогенна Escherichia coli. J Clin Microbiol. 47 (6): 1915-1917. DOI: 10.1128/JCM.00608-09 [Връзки]

Barret J., H. Lior, J.H. Грийн и др. 1994. Лабораторно изследване на многостепенна епидемия от Escherichia coli, пренасяна с храна O157: H7. J. Clin. Микробиол. 32: 3013-3017. [Връзки]

Blanco J. 2012. Ентероагрегативна Escherichia coli O104: H4-ST678, продуцираща Stx2a. Микробиологична диагностика сега, на този и други STEC/VTEC серотипове! Болен Infecc. Микробиол. Clin. 30 (2): 84-89. DOI: 10.1016/j.eimc.2011.09.008 [Връзки]

Blanco J., M. Blanco, J.E. Blanco et al. 2003. Веротоксин, произвеждащ Escherichia coli (VTEC) в Испания: Разпространение, серотипове и гени на вирулентност на O157: H7 и non-O157 VTEC при преживни животни, сурови говежди продукти и човешки инфекции. Exp. Biol. Med. 228: 345-351. [Връзки]

Blanco J.E., M. Blanco, A. Mora et al. 1996. Откриване на ентерохеморагична Escherichia coli O157: H7 в мляно говеждо месо с помощта на имуномагнитно разделяне. Микроб. SEM 12: 385-394. [Връзки]

Бланко М., Н.Л. Падола, А. Крюгер и сътр. 2004. Гени на вирулентност и интимин на видове Escherichia coli, произвеждащи шига-токсин, изолирани от говеда и говеждо месо в Аржентина. Микробиол. 7: 269-276. [Връзки]

Браво V.J.B. & L.B. Вилалобос де Бастардо. 2002. Ентерохеморагична ешерихия коли в месни продукти, комерсиализирани на общинския пазар в Куман, Венецуела. Rev. Soc. Ven. Микробиол. 22 (2): 119-121. [Връзки]

Cicuta M.E., N. Deza, W.R. Roibón et al. 2006. Откриване на Escherichia coli, произвеждаща токсин от Shiga в говеда и говеждо месо от Corrientes, Аржентина. Преподобен ветеринар. 17 (1): 20-25. [Връзки]

Clark W.F., J.M. Sontrop, J.J. Macnab et al. 2010. Дългосрочен риск от хипертония, бъбречно увреждане и сърдечно-съдови заболявания след гастроентерит от питейна вода, замърсена с Escherichia coli O157: H7: Проспективно кохортно проучване. BMJ 341: c6020: 1-09. DOI: 10.1136/bmj.c6020 [Връзки]

Copes J., K. Pellicer, G. Del Hoyo et al. 2009. Първа изолация на Е. coli O157: H7 от хамбургери в Парагвай. Ветеринарна Analecta 29 (1): 11-14. [Връзки]

Donnenberg M., S. Tzipori, M. Mc Kee et al. 1993. Ролята на гена eae на ентерохеморагичната Е. coli в интимната привързаност in vitro и в свински модел. J. Clin. Инвестирам. 92: 1418-1424. [Връзки]

Дорн Р.Ц. 1995. Ешерихия коли O157: H7. JAVMA 206: 1583-1585. [Връзки]

Feldsine P.T., D. E. Kerr, S.C. Leung и сътр. 2002. Тест за визуален имунопреципитат Осем часа Метод за откриване на ентерохеморагична Escherichia coli O157: H7 в сурово и варено говеждо месо (модификация на официалния метод AOAC 996.09): Проучване за сътрудничество. Вестник на AOAC International 85 (5): 1029-1036. [Връзки]

Feng P., M. Dey, A. Abe et al. 2001. Изогенни щамове на Escherichia coli O157: H7, който е загубил и двата Shiga токсина 1 и 2 гена. Clin. Диагностика. Лаборатория Имунол. 8 (4): 711-717. [Връзки]

Frenzen P.D., A. Drake & F.J. Ъгъл. 2005. Икономически разходи за заболяване поради инфекции с Escherichia coli O157 в Съединените щати. J. Food Prot.68: 2623-2630. [Връзки]

Guion C.E., T. Ochoa, C.M. Уокър и сътр. 2008. Откриване на диареогенна ешерихия коли чрез използване на анализ на кривата на топене и мултиплексна PCR в реално време. J. Clin. Микробиол. 46 (5): 1752-1757. DOI: 10.1128/JCM.02341-07 [Връзки]

Huapaya B., J. Huguet, v. Суарес и др. 2001. Първо изолиране на ентерохеморагична ешерихия коли O157: H7 в Перу. Rev. Med. Exp. 18 (1-2): 38-39. [Връзки]

Huguet J., B. Huapaya & E. Salazar. 2002. Определяне на факторите на вирулентност, свързани с ентерохеморагичната Escherichia coli в перуански щамове, изолирани между 1999 ? 2001. Rev. Peru Med. Exp. Public Health 19 (2): 63-67. [Връзки]

ICMSF (Международна комисия по микробиологичните спецификации за храните) 1996 г. Чревно патогенна Escherichia coli. В Микроорганизми в храните 5. Характеристики на микробиолните патогени, Gaythersburg. M.D .: Aspen Publishers, Inc. Pp: 126-140. [Връзки]

Karch H., J. Heesemann, R. Laufs et al. 1987. Плазмид от ентерохеморагична Escherichia coli O157: H7 е необходим за експресия на нов фимбриален антиген и за адхезия към епителни клетки. Инфектирайте. Имун. 55: 455-469. [Връзки]

Кармали М.А. 1989. Инфекция от продуциращ вероцитоксин Escherichia coli. J. Clin. Микробиол. 2 (1): 15-38. [Връзки]

LukГsovГ J., B. Abraham & S. CupГЎkovГ. 2004. Поява на Escherichia coli O157 в суровини и храни в Чехия. J. Vet. Med. B 51: 77-81. DOI: 10.1111/j.1439-0450.2004.00727.x [Връзки]

Marzocca M.A., P.L. Маручи, М.Г. Sica et al. 2006. Откриване на Escherichia coli O157: H7 в прясно смляно говеждо и замразени хамбургери. Преподобни Аржент. Микробиол. 38: 38-40. [Връзки]

MГttar S., J. Pulido, E. VÃЎsquez et al. 1997. Ентеропатогенни щамове Escherichia coli, изолирани в Колумбия от деца с диария: серотипове и лекарствена резистентност. Медицински изследвания 25 (2): 615-617. [Връзки]

Мийд П.С. & P.M. Грифин. 1998. Ешерихия коли O157: H7. Lancet 352: 12071212. DOI: 10.1016/S0140-6736 (98) 01267-7 [Връзки]

Michimo H., K. Arakaki, S. Minami et al. 1999. Масивно огнище на ешерихия коли O157: H7 инфекция при ученици в град Сакай, Япония, свързана с консумация на кълнове от бяла ряпа. Am. J. Epidemiol. 150: 787-796. [Връзки]

Мора А., С.Л. Leon, M. Blanco, J.E. Blanco, C. López, G. Dahbi, A. Echeita, E.A. GonzGlez & J. Blanco. 2007. Фагови типове, гени за вирулентност и профили на PFGE на произвеждащия токсин Shiga Escherichia coli O157: H7, изолиран от сурово говеждо меко сирене и зеленчуци в Лима (Перу). Международен вестник по хранителна микробиология 114 (2): 204-210. doi: 10.1016/j.ijfoodmicro.2006.09.009. [Връзки]

Morato Bergamini A.M., M. Simoes, K. Irino et al. 2007. Разпространение и характеристики на щамове, произвеждащи шиши токсин Escherichia coli (STEC) в говеждо месо в Сао Пауло, Бразилия. Браз. J. Microbiol. 38 (3): 553-556. DOI: 10.1590/S1517-83822007000300032 [Връзки]

Muniesa M. & J. Jofre. 2004. Изобилие в канализация на бактериофаги, заразяващи Escherichia coli O157: H7. Методи Mol. Biol. 268: 79-88. DOI: 10.1385/1-59259-766-1: 079 [Връзки]

Натаро Дж. & Karper J.B. 1998. Диарегенна ешерихия коли. Clin. Микробиол. Откр. 11: 142-201. [Връзки]

OВ’brien A.D. & R.K. Хорни. 1987. Шига и подобни на Шига токсини. Микробиол. Откр. 51: 206-220. [Връзки]

Орсков Ф., И. Орсков и Й.А. Вилар. 1987. Говеда като резервоар на произвеждащи веротоксин Escherichia coli O157: H7. Лансет: 276. [Връзки]

Phillips A.D., S. Navabpour, S. Hicks et al. 2000. Ентерохеморагична Escherichia coli O157: H7 насочва петна на Peyer при хора и причинява прикрепящи/заличаващи лезии както в червата на човека, така и в говедата. Черва 47: 377-381. DOI: 10.1136/gut.47.3.377 [Връзки]

Пиедрахита Д., Т. Мъркес и С. Матар. 2001. Откриване на Escherichia coli O157: H7 при популации от свине, говежди трупове и месни продукти в департамент Cárdoba. MVZ-CORDOBA 6 (2): 119-126. [Връзки]

RM. N °. 591-2008-MINSA. Одобрява: «Санитарен стандарт, който установява микробиологичните критерии за санитарно качество и безопасност на храните и напитките за консумация от човека» EL Peruano, Legal Norms, 29 август 2008 г .: 378827.

Riley L.W., R.S. Remis, S.D. Helgerson et al. 1983. Хеморагичен колит, свързан с рядък серотип на Escherichia coli. N. Engl. J. Med. 308: 681-685. DOI: 10.1056/NEJM198303243081203 [Връзки]

Rivas M., S. Sosa-Estani, J. Rangel et al. 2008. Рискови фактори за спорадични инфекции на Escherichia coli, произвеждащи токсини от шига при деца, Аржентина. Emerg. Инфектирайте. Дис. 14 (5): 763-771. DOI: 10.3201/eid1405.071050 [Връзки]

Rivera F.P., E. Sotelo, I. Morales et al. 2012. Кратко съобщение: Откриване на шига токсин, произвеждащ Escherichia coli (STEC) при здрави говеда и свине в Лима-Перу. J. Dairy Sci. 95: 1166-1169. doi: 10.3168/jds.2011-4662 [Връзки]

RoldГn M.L., I. Chinen, J.L. Otero et al. 2007. Изолиране, характеризиране и подтип на Escherichia coli O157: H7 щамове от месни продукти и мляко. Преподобни Аржент. Микробиол. 39: 113-119. [Връзки]

Schmidt H., L. Beutin & H. Karch. 1995. Молекулярен анализ на кодирания с плазмид хемолизин на Escherichia coli O157: H7 щам 933. Infect. Имун. 63: 1055-1063. [Връзки]

Siegler R.L. 1995. Хемолитично-уремичен синдром. Педиатър. Clin. Северна Am.42: 1505-1529. [Връзки]

Strockbine N.A., L.R.M. Marques, J.W. Newland et al. 1986. Два фага, превръщащи токсините от Escherichia coli O157: H7 щам 933, кодирани антигенно различни токсини със сходна биологична активност. Инфектирайте. Имун. 53: 135-140. [Връзки]

САЩ/FIS. Безопасност на храните в САЩ. 2005. Служба на лаборатория QA/QC Division. Лабораторно ръководство FSIS Процедура за използване на Escherichia coli O157: H7 и O157: NM (не подвижни) Скринингови тестове. [Връзки]

Varela G., I. Chinen, P. Gadea et al. 2008. Откриване и характеризиране на Е. coli, произвеждаща токсин от шига, от клинични случаи и храни в Уругвай. Преподобни Аржент. Микробиол. 40: 93-10. [Връзки]

Wetzel A.N. & J.T. Le Jeune. 2007. Изолиране на Escherichia coli O157: H7 щамове, които не произвеждат токсин Shiga от говежди, птичи и екологични източници. Писма в Appl. Микробиол. 45: 504-507. DOI: 10.1111/j.1472-765X.2007.02228.x [Връзки]

СЗО (Световната здравна организация). 1997. Консултация за превенция и контрол на ентерохеморахагични (EHEC) инфекции. В: Световна здравна организация. Сборник от доклада на СЗО. Консултация, Женева, Швейцария. [Връзки]