Изследване на експресията на прогестеронови и естрогенни рецептори в ендометриума на овце, хранени с нормална диета и допълнена диета

Изследване на експресията на прогестеронови рецептори в ендометриума на овце-майки с нормална и допълнителна диета

*, ** Adriana Vasconcellos C.; ** Марко Паредес Х .; ** Даниела Нуньес Р .; ** Едуардо Бариентос V.; ** Йоселин Олмазабал С. и ** Хавиера Наварете V.

* Дълбочина. на фундаменталните науки Медицински факултет, Университет на Ла Фонтера, Темуко, Чили

** LIMBA, Лаборатория за биотехнологии за животни, Университет де Ла Фронтера, Чили.

КЛЮЧОВИ ДУМИ: Араукана креолски овце, репродуктивна система, хранене на овце.

КЛЮЧОВИ ДУМИ: Араукана креолска овца; Репродуктивна система; Храна за овце.

ВЪВЕДЕНИЕ

МАТЕРИАЛ И МЕТОД

Използвани са 8 овце Criolla Araucana на възраст от 2 до 4 години, отглеждани в експерименталното поле Maquehue (Регион Araucanía), които бяха разделени на две равни групи. И двете групи бяха държани на смесена ливадна основа с многогодишна райграс и бяла детелина (стандартна диета). Освен това една от групите имаше ежедневен достъп след паша до добавка с 250 g/ден овесено зърно и 30 g/ден суров протеин (допълнена диета).

Етапът на естрозния цикъл е потвърден чрез анамнеза, хистологично изследване и измерване на концентрациите на прогестерон и естроген в кръвта (данните не са показани). След жертването репродуктивната система беше отстранена, като незабавно бяха разделени двата маточни рога, единият от които беше фиксиран във воден Bouin за имунохистохимично изследване, а другият беше замразен в течен азот за екстракция на РНК.

експресията

Получаване на праймери за RE и RP усилване чрез RT-PCR в реално време. Праймерите, използвани за PCR анализ в реално време (Таблица I), са получени от овчи ER cDNA последователности, налични в базата данни GenBank, достъпна на уеб сървъра на Националния център за биотехнологична информация (http://www.ncbi.nlm. nih.gov). Праймерите, използвани за амплифициране на b-актин cDNA (Таблица I) са получени от Dzidic и др., (2004). Биоинформатичният дизайн на стартерите е извършен с програмата "Primer 3" (http://primer3.sourceforge.net/).

Имунохистохимичният анализ на естрогенните и прогестероновите рецептори в ендометриалната тъкан на възрастни овце, поддържан със и без хранителна добавка, показва съществуването на имунохистохимична реакция срещу двата рецептора и в двете групи овце (фиг. 1 и 2). Имунореактивните сигнали са особено забележими на ядрено ниво в клетките на ендометриалната жлеза и стромалните клетки, разположени в карункуларните жлезисти области на ендометриума (фиг. 1 и 2). Частична имунореакция се наблюдава и в клетките на лигавичния епител (фиг. 1А и 2А). Наблюдава се по-голямо количество имунореактивни клетки, както и по-голяма интензивност на марката на двата рецептора в ендометриалната тъкан на овце с добавки в сравнение с тези, които са били хранени със стандартна диета (Фиг. 1 и 2). Преписът на RP и ER е открит в обща РНК, извлечена от ендометриума на овце, хранени със стандартна диета, както и с допълнена диета (Фиг. 3).

Фиг. 1. Имунохистохимична експресия на ER в ендометриума на овце с недопълнена диета (A и C) и допълнена (B и D). Откроява се имунореакцията в стромалните клетки (А и В) и в жлезистия епител (С и D) (дебела стрелка). Също така е посочена (тънка стрелка) липса на имунореактивност в ендометриалния епител и някои клетки на жлезистия епител. Фигура 1 A и 1 B (400X), Фигура 1 C и 1D (1000X).

Фиг. 2. Имунохистохимична експресия на RP в ендометриума на овце с недопълнена диета (A и C) и допълнена (B и D). Откроява се имунореакцията в стромалните клетки (А и В) и в жлезистия епител (С и D) (дебела стрелка). Тънката черна стрелка показва липса на имунореактивност в ендометриалния епител и някои клетки на жлезистия епител. Фигура 2 A и 2 B (400X), Фигура 2 C и D (1000X).

Фиг. 3. Откриване на ER и RP транскрипти чрез RT-PCR, оцветени с бромид
етидий (0,5 mg/mg) и се визуализира върху 1,8% агарозен гел.

Оценката на нивото на експресия на ER и RP транскрипти в проби от ендометриална тъкан, подобни на тези, използвани за имунохистохимична оценка, показва, че ER и RP транскриптите се експресират на по-високо ниво в ендометриалната тъкан от овце, които са били хранени с добавки. Фиг. 4).

Фиг. 4. Графично представяне на нивото на експресия на RE (A) и RP (B) преписи в ендометриума на допълнени и недопълнени овце. Експресионният анализ се извършва чрез RT-PCR в реално време, използвайки експресията на b-актинов ген като ендогенен контрол.

Заключението е, че както имунохистохимичната, така и транскрипционната експресия на ER и PR е по-висока в ендометриума на овце, които са получили допълнени диети, в сравнение с овцете, поддържани със стандартна диета.

БЛАГОДАРЯ

Благодарим на дирекция „Изследвания“ на Университета де ла Фронтера, Темуко, Чили, за финансовата подкрепа, предоставена чрез проект DIUFRO 107-0017

БИБЛИОГРАФСКА ЛИТЕРАТУРА

Abecia J .; Sosa, C.; Forcada, F. & Meikle A. Ефектът на недохранването върху установяването на бременност при овцете. Възпроизвеждане Nutr. Dev., 46: 367-78, 2006. [Връзки]

Кларк, Дж .; Schrader, W. & O'Malley, B. Механизми на действие на стероидни хормони. В Учебник по ендокринология на Уилямс. Ed. W. B. Saunders, 1992. Pp. 35-90. [Връзки]

Clark, J. & Mani, S. Действия на яйчниковите стероидни хормони. В Knobil E., Neill J D. (Eds). Физиологията на размножаването. Raven Press, Ню Йорк, 1994 г. Стр. 1011-1059. [Връзки]

Chomczynski, P. & Sacchi, N. Едноетапен метод за изолиране на рНК чрез кисела екстракция на гуанидиний тиоцианат-фенол-хлороформ. Анална биохимия., 162: 156-59, 1987. [Връзки]

Лозано, Дж .; Abecia, J .; Форкада, Ф .; Zarazaga, L. & Alfaro B. Ефект на недохранването върху разпределението на прогестерона в утуруса на овце-майки по време на лутеалната фаза на естрозния цикъл. Териогенология, 49: 539-46, 1997. [Връзки]

Meikle, A .; Гарофало, Е .; Tasende, C.; Rodríguez-Piñón & Shalin, L. Регулация от гонадни стероиди на естрогенни и прогестеронови рецептори по репродуктивния тракт при женски агнета. Acta Vet. Scand., 42: 161-9, 2001. [Връзки]

Meikle, A .; Tasende, C.; Sosa, C. & Garófalo, E. Ролята на половите стероидни рецептори в репродуктивната физиология на женските овце. Възпроизвеждане Nutr. Дев., 16: 385-94, 2004. [Връзки]

Scaramuzzi, R.; Кембъл, Б .; Даунинг, Дж .; Kendall, N .; Халид, М.; Muñoz-Gutiérrez, M. & Somchit, A. Преглед на ефектите от допълнителното хранене в концентрациите на репродуктивни и метаболитни хормони и механизмите, които регулират фоликулогенезата и скоростта на овулация. Възпроизвеждане Nutr. Dev., 46: 339-54, 2006. [Връзки]

Sosa, C.; Лозано, Дж .; Виньолес, С .; Acuña, S .; Abecia, J .; Форкада, Ф .; Fosberg, M. & Meikle, A. Ефект на равнината на хранене върху експресията на ендометриален стероиден рецептор при овцете. Наука за възпроизводството на животни, 84: 337-48, 2004. [Връзки]

Spencer, T. & Bazer, W. Временни и пространствени промени в експресията на маточния естрогенен рецептор и гена на прогестероновия рецептор по време на естрозния цикъл и ранната бременност при овцете. Biol. Reprod., 53: 1527-43, 1995. [Връзки]

Васкончелос, А.; Паредес, М.; Carrasco, J. & Núñez D. Анализ на експресията на естрогенни и прогестеронови рецептори в ендометриума на овцете от породите Ромни Марш и Араукана. Int. J. Morphol., 27 (1):97-100, 2009. [Връзки]

Vasconcellos, A., Sepúlveda, N., Castillo, J., Rosas, C. Наличие на естрогенни и прогестеронови рецептори в ендометриума на предпубертетни овце. Имунохистохимично изследване. Международна J. Morphol., 23 (4): 393-6, 2005. [Връзки]

Адрес за кореспонденция:

Марко Паредес З.
Медицински факултет
Университет на Ла Фронтера
Клетка 54-D
Temuco - ЧИЛИ

Получава се: 02-24-2010
Приет: 26.03.2010

Цялото съдържание на това списание, с изключение на случаите, когато е идентифицирано, е под лиценз Creative Commons

Тел .: (56-45) 232 5571

Факс: (56-45) 232 5600


[email protected]