Текстът завършен

(1) UNIVERSIDAD AUTÓNOMA AGRARIA "ANTONIO NARRO" ОТДЕЛ НА НАУЧНИЯ ЖИВОТИНСКИ ОТДЕЛ ЗА НАУКА И ТЕХНОЛОГИИ НА ХРАНИТЕ. Микробиологично изследване на течност от преживни животни от диви храни, хранени с добитък от Холщайн, обогатени с продукти от пивоварната индустрия (шпакловка и мая) От: LIDIA GUADALUPE VALDEZ SEPÚLVEDA. ТЕЗАТА, представена като частично изискване за придобиване на заглавието на: ИНЖЕНЕР В ХРАНИТЕЛНАТА НАУКА И ТЕХНОЛОГИИ. Buenavista, Saltillo, Coahuila март, 2010 г.

изследване

(3) Тази изследователска работа е разработена в рамките на ангажираните дейности по проект "Изолиране и частично идентифициране на бактерийни микроорганизми, присъстващи в проби от едър рогат добитък" с код 02-03-0402-2378. Проектът е финансиран от Автономния аграрен университет „Антонио Наро“ по поканата за специални изследователски проекти. Оценителите на това изследване бяха: д-р Ана Вероника Чарлз Родригес д-р Хуан Енрике Маурисио Бенавидес д-р Антонио Франциско Агилера Карбо д-р Хесус Мануел Фуентес Родригес LCN. Лаура Марисела Лара Лопес. i.

(4) ... Защото виждам в края на моя груб път, че бях архитект на собствената си съдба; че ако извличах мед или жлъчка от нещата, това беше, защото в тях слагах жлъчка или вкусни медове: когато засаждах розови храсти, винаги прибирах рози ... Възлюбена Нерво ii.

(6) ПОСВЕТЕНИЯ С любов и обич към родителите ми: г-жа Лора Минерва Сепулведа Мартинес Г-н Фаустино Валдес Торес Благодаря ви, че ме насърчихте да завърша мечтите си, винаги съм щастлив да имам вашата любов, разбиране и пример. По всяко време от живота ми те са били участници и сътрудници на моите цели и цели. Благодаря ви много, че ми дадохте възможност да започна този професионален път. Постигнатата цел е ваша и силата, която ми помогна да я постигна, беше вашата подкрепа. На моите сестри: Лора Джудит и Лусеро Ванеса, благодаря, че сте най-добрите ми приятели, за вашата компания и подкрепа. На гаджето ми Исмаел Менера Лопес, благодаря за. вашата морална подкрепа д. безусловна, за това, че ме насърчавате и ме карате да се усмихвам, благодаря, че ми дадохте вашата любов На моите баба и дядо Лили (†), Миро (†), Балде (†) и Лупита, надявам се да се гордеят с мен. До Pbro. Луис Родригес дел Рио, благодаря ти за ценните съвети и духовната ти подкрепа в началото на кариерата ми и през целия ми живот.

(7) ОБЩИ ИНДЕКСИ РЕЗЮМЕ 1. ВЪВЕДЕНИЕ 1.1 Контекст 1.2 Обосновка 1.3 Хипотеза 1.4 Обща цел 1.5 Специфични цели 2. ПРЕГЛЕД НА ЛИТЕРАТУРАТА 2.1 Румен 2.1.1 Околна среда 2.1.2 Микробна популация 2.1.2.1 Бактерии 2.1.2.2 Протозои 2.1. 2.3 Гъби 2.1.3 Микробен метаболизъм на румена 2.1.3.1 Разграждане на въглехидратите в червеца 2.2 Странични продукти от пивоварната промишленост в фуражите за животни 2.2.1 Шпакловка 2.2.2 Дрожди 2.2.2.1 Растеж, ферментация и производствен процес 2.2.3 Saccharomyces cerevisiae 2.2. 3.1 Активен 2.2.3.2 Неактивен 2.2.3.3 Обогатен 2.2.4 Ефект от добавянето на шпакловка и мая при ферментация на преживни животни 2.3 Целулазен ензим 2.3.1 Общи положения на ензимите 2.3.1.1 Специфичност на ензимите 2.3.1.2 Специфичност на субстрата 2.3.1.3 Влияние на рН върху ензимите 2.3.1.4 Влияние на температурата върху ензимите 2.3.2 Целулоза 2.3.2.1 Разпределение и получаване. 1 2 2 3 4 4 4 6 6 6 7 7 9 10 11 11 14 15 16 17 19 20 20 21 21 22 22 23 23 23 23 24 25.

(8) 2.3.2.2 Употреба на целулоза 2.3.2.3 Хидролиза на целулоза 2.3.2.4 Микроорганизми, произвеждащи целулаза 3. МАТЕРИАЛИ И МЕТОДИ 3.1 Кондициониране и добив на добитък от Холщайн. 25 26 27 29. течност от преживни животни. 29. 3.2 Изолиране на прокариоти в хранителен агар. 30. 3.3 Изолиране на прокариоти върху агар на Scheadler. 31. 3.4 Пречистване на изолирани микроорганизми. 31. 3.5 Идентифициране на микробния метаболизъм. 32. 3.5.1 Симонс цитрат. 33. 3.5.2 Агар на MacConkey. 33. 3.6 Производство на целулаза 3.6.1 Анализ (скрининг). 33 33. 3.6.2 Крива на растеж в течна среда в натриев тиогликолат. 34. 3.6.3 Крива на растеж в специфична течна среда за получаване на целулаза. 34. 3.6.4 Определяне на извънклетъчния протеин по метода на Biuret. 35. 3.6.5 Определяне на редуциращи захари (Somogy-Nelson) 36 4. РЕЗУЛТАТИ И ДИСКУСИИ 5. ЗАКЛЮЧЕНИЯ 6. БИБЛИОГРАФСКИ РЕФЕРЕНЦИИ 7. ПРИЛОЖЕНИЯ. 39 69 71 78.

(9) ИНДЕКС НА ТАБЛИЦИТЕ Страница Таблица 1. Родове и видове бактерии според техния афинитет към вида на. субстрат в комплекса ретикулум-румен. 9. Таблица 2. Родове от преживни животни с възможност за разграждане на субстрати Таблица 3. Химичен състав на дрождите. 10 бира. 16. Таблица 4. Ензими, участващи в ензимната хидролиза на целулозата. 27. Таблица 5. Диета на млечни говеда, хранени с шпакловка и мая. 30. Таблица 6. Химичен състав на специфичната твърда среда за скрининг на разграждането на целулозата. 34. Таблица 7. Химичен състав на специфичната течна среда за получаване на целулаза. 35. Таблица 8. Подготовка на проби за количествено определяне на общите протеини по метода на Biuret. 36. Таблица 9. Макроскопска морфология на микроорганизми, изолирани върху хранителен агар. 41. Таблица 10. Макро- и микроскопична морфология на микроорганизми, изолирани върху агар на Шадлер. 46. ​​Таблица 11. Резултати от биохимичните тестове за щамовете. 57.

(16) Микробиологично изследване на течността от преживни животни от диетата, хранена с добитък от Холщайн, обогатена с продукти от пивоварната промишленост (шпакловка и мая). 8. Използвайте бактериален микроорганизъм за производството на целулазния ензим от индустриален интерес чрез проектирането на индуктивна хранителна среда. 9. Определете и количествено определете целулолитичната активност, използвайки спектрофотометрични техники. Valdez-Sepúlveda, 2010. 5.

(18) Микробиологично изследване на течността от преживни животни от диетата, хранена с добитък от Холщайн, обогатена с продукти от пивоварната индустрия (шпакловка и мая). растеж на същия, произвеждащ количество протоплазма, еквивалентно на 10% от общата течност в търбуха (Warner, 1962) . 2.1.2 Микробна популация Микробната популация в червея е променлива, с преобладаване на бактерии и ресничести протозои, но може да се появи значително количество дрожди. Като цяло и поради условията, преобладаващи в рубеца, повечето от микроорганизмите са анаеробни или факултативни анаероби. Някои от най-важните бактериални родове за способността им да разграждат основните въглехидрати (въглехидрати) в храната са: Бактериоиди, Руминококи, Сукциноми, някои Clostridia, Celobacteria и Butivibrio (Hungate, 1966) . 1.1.2.1 Бактериите Бактериите са The най-разпространените микроорганизми в комплекса ретикулум-румен се класифицират по тяхната форма (фигура 1) или афинитет към субстрата . Коки. Бацили Спирилос. Фигура 1. Морфологична класификация на бактериите в комплекса ретикулум-румен (Източник: Rodríguez and Valencia, 2008) . Valdez-Sepúlveda, 2010. 7.

(21) Микробиологично изследване на течността от преживни животни от диетата, хранена с добитък от Холщайн, обогатена с продукти от пивоварната промишленост (шпакловка и мая). Таблица 2. Родове от преживни животни със способност да разграждат целулолитичните субстрати. Амилолитици. Протеолитици. Polyplastron Eudiplodinium Epidinium. Ентодиний. Entodiniumn Eudiplodinium. (Източник: Rodríguez and Valencia, 2008) . Най-често срещаните протозои в червея принадлежат към родовете: Isotriquia, Dasitriquia, Diplodinio и Entondinio (Hungate, 1966). Младите протозои (Eadie, 1962), Monocercomonas, Calimastix се срещат и при младите преживни животни; Chilomastix, Tetrattricomonas и др. като тези, представени на фигура 2 (Hungate, 1966) . Фигура 2. Илюстрации на протозои, които обитават ретикулумния комплекс (Източник: Rodríguez и Valencia, 2008) . 2.1.2.3 Гъби Микрофлората на преживните животни също има гъбички, микроскопични, които помагат при храносмилането на храната. Те са класифицирани в групата Chytridomicota на царството Fungae (Rodríguez and Valencia, 2008). Гъбите, открити в червея, имат способността да ферментират полизахариди (целулоза), като се изчислява, че повече от 8% от микробната биомаса на червея се състои от тях (Nava and Díaz, 2001). Valdez-Sepúlveda, 2010. 10.

(24) Микробиологично изследване на течността от преживни животни от диетата, хранена с добитък от Холщайн, обогатена с продукти от пивоварната индустрия (шпакловка и мая). Фигура 3. Пътища на метаболизма на въглехидратите в рубеца (Източник: Grudsky and Arias, 1983). Способността на микроорганизма на преживните животни да ферментира специфичен въглехидрат зависи от наличието на ензима, необходим, за да може да използва този въглехидрат. От различни бактериални видове на рубея са изолирани множество ензими, сред които хемицелулази, целулази, фосфорилази. амилази,. изомалтодекстринази,. изомалтази,. и т.н. Те съществуват. а-галактозидази, някои. ензими. захарази, хидролитични. Налични извънклетъчни клетки, които упражняват своето действие на определено разстояние от бактериалните колонии, които са ги произвели. Повечето бактерии използват един или повече видове основни хранителни въглехидрати на преживните животни като източник на енергия за растежа си. Тези, които не използват тези въглехидрати, използват най-простите въглехидратни продукти от тези или основните крайни продукти на метаболизма (Grudsky and Arias, 1983) . Valdez-Sepúlveda, 2010. 13.

(30) Микробиологично изследване на течност от преживни животни от диетата, хранена с добитък от Холщайн, обогатена с продукти от пивоварната промишленост (шпакловка и мая). добавят се хранителни вещества, течността се аерира за допълнителни 0,5 до 1 час, за да позволи на маята да узрее напълно, като по този начин позволява по-голяма стабилност при съхранение в хладилник. Обемът на растеж на дрождите в основните етапи, описани по-горе, се увеличава с всеки етап (García, 2007) 2.2.3 Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae е дрожди, които представляват групата на микроорганизмите, най-тясно свързани с напредъка и благосъстоянието на човечеството (фигура 4); името му произлиза от думата Saccharo (захар), myces (гъби) и cerevisiae (бира) (Hernández, 1999) . Фигура 4. Сканираща електронно-микроскопска снимка на Saccharomyces cerevisiae (Източник: Llamas, 2008) . Saccharomyces cerevisiae дрожди It може да има 3 варианта, тоест е: активен, неактивен или обогатен. Valdez-Sepúlveda, 2010. 19.

(36) Микробиологично изследване на течност от преживни животни от диетата, хранена с добитък от Холщайн, обогатена с продукти от пивоварната индустрия (шпакловка и мая). Фигура 6. Снимка на структурите, присъстващи в растителната тъкан (Източник: Lara, 2006) . 2.3.2.1 Разпределение и производство Целулозата е основният компонент на растителните клетъчни стени, където те са свързани с хемицелулози, пектин и лигнин. Този полизахарид не се атакува от ензимите на храносмилателната система на човешкия организъм и следователно представлява, заедно с останалите полизахариди, наречени инертни, несмилаемата част от храни от растителен произход, наречена сурови фибри, от голямо значение като индуктор на чревната перисталтика (Belitz, 1992) . 2.3.2.2 Използване на целулоза Микрокристалната целулоза се използва наред с други продукти, в калорични храни, сосове за салати, десерти и сладоледи. Хидратируемостта и диспергируемостта на целулозата се подобрява значително чрез добавянето на малки количества карбоксиметилцелулоза (Belitz, 1992) . Valdez-Sepúlveda, 2010. 25.

(39) Микробиологично изследване на течност от преживни животни от диетата, хранена с добитък от Холщайн, обогатена с продукти от пивоварната промишленост (шпакловка и мая). Сред тези микроорганизми са интересни термофилните заради способността им да произвеждат термостабилни целулолитични ензими, които обикновено са стабилни при тежки условия, дори при силно киселинни или алкални нива на pH, както и при температури до 90 ° C. Valdez-Sepúlveda, 2010. 28.