Активност на панкреатичния липазен ензим при бройлери, консумиращи брашно от плода на Roystonea regia в дажбата. Техническа бележка

бройлери

2 Институт по наука за животните, пощенска кутия 24, Сан Хосе де лас Лахас, Маябеке, Куба

40 мъжки бройлери бяха използвани за определяне на активността на панкреатичния липазен ензим от бройлери, консумиращи плодово брашно от Roystonea regia (палмово брашно) в дажбата. Приложен е напълно рандомизиран дизайн с четири обработки, които се състоят в заместване на 0, 5, 10 и 15% за палмово брашно. На 42 дни те бяха жертвани за получаване на панкреаса и бе определена ензимната активност на панкреатичната липаза. Наблюдава се ефектът от диетата върху този показател, който е по-голям при пилета, които консумират палмово брашно, в сравнение с контролната диета (1983 срещу 2500, 2566 и 3283 ml NaOH/min/mg протеин, съответно) (P Oliva et 2018 г.). Олеиновата, лауриновата, палмитиновата и линолевата киселини преобладават в неговото масло, което съдържа 8 и 18 въглеродни атома, главно отговорни за статута му на енергиен източник. Palmiche е една от основните алтернативни енергийни храни, които се предлагат в Куба, където е популярна като нетрадиционен източник на храна за прасета (Ly et al. 2017), но без конкретни резултати при птиците.

Като висок източник на липиди, за да се усвоят в стомашно-чревния тракт на птиците, палмовите ядки се нуждаят от липолитични ензими. Сред тях панкреатичната липаза е една от най-изследваните. Този ензим може да се използва като маркер за усвояването на тази фракция. Следователно целта на това проучване е да се определи ензимната активност на панкреатичната липаза при бройлери, които консумират плодово брашно от Roystonea regia в дажбата.

Използвани са четиридесет и осем дни мъжки бройлери (HE21), настанени в метални клетки. Животните бяха подложени на експериментални диети, от 8 дни до 42 дни, които бяха формулирани в съответствие с изискванията, установени от NRC (1994) за тази категория птици. Контролът се състоеше от конвенционална соево-царевична диета. В останалите три обработки бяха включени 5, 10 и 15% палмово брашно, така че изопротеиновите и изоенергийните диети бяха поддържани за началния, растежния и финален период. През цялото време на експериментите пилетата имаха свободен достъп до вода и храна.

Палмовото дърво в натура е получено от провинция Маябеке. Процесът на сушене се състоеше от отделяне на семената от палмови ядки ръчно и след това те бяха изложени на слънце, разпръснати върху сушилна плоча, в продължение на пет последователни дни.

Сухият материал се съхранява в чували, на закрито, в складове с подходяща вентилация и ниска влажност. На всеки пет дни то се смила с останалите компоненти от диетата на зърнени култури и зърнени култури в съответната пропорция, с цел удължаване на полезния живот на палмовото брашно, което бързо става гранясало и намалява неговото биологично качество и вкусови качества ( Oliva et al. 2018).

На 42 дни от експеримента, десет пилета бяха претеглени и заклани на лечение, съгласно метода на кървене от югуларна вена. За това бяха спазени традиционните процедури (зашеметяване, кървене и изкормване), точно два часа и тридесет минути след поглъщането на животните, за да се вземат проби от панкреаса и да се получи хомогенат на панкреаса. Веднага панкреасът се отстранява от всяко пиле и се потапя в 4 mL/g физиологичен разтвор, между 0 и 4 ° C, за прехвърляне в лабораторията. Органите на три животни се хомогенизират ръчно. Те бяха центрофугирани при 5000 об./Мин. за 10 минути при 4 ºC в хладилна центрофуга с марка Thermosciaching IEC CL31R. Пелетата се изхвърля и супернатантата се съхранява в малки аликвотни части при -80 ° С.

Концентрацията на протеини се определя по метода на Bradford (1976) на Rigol UV-vis спектрофотометър, серия Ultra-3400. Изчисляването на концентрациите се извършва чрез интерполиране на стойностите на абсорбция на пробите в стандартната крива на говежди серумен албумин (BSA) (0,01-5 mg/ml). Това беше стандартизирано за всички изследвани хомогенати при 3 mg/ml, за които бяха направени съответните разреждания за всеки отделен случай. Всички анализи бяха извършени в три екземпляра.

За да се постигне максимална надеждност при определяне на ензимната активност, беше разработен предложеният линеен диапазон за ензима, за който беше използвано време на инкубация от пет минути (León et al. 2014). Активността на липазата се определя по метода, предложен от Tietz и Fiereck (1966). Необходимият обем NaOH (50 mM) беше определен за неутрализиране на освободените мастни киселини след ензимно разграждане. Системата се поддържа при умерено разбъркване при 37 ° С и като субстрат се използват 3 мл зехтин. Активността на ензима се изразява като mL NaOH/min/mg протеин.

За статистическия анализ на резултатите е използван напълно рандомизиран дизайн с четири лечения и три повторения (по три панкреаса). Разликите между средните стойности се определят според Duncan (1955), когато е необходимо. Използваният статистически пакет беше Infostat (Di Rienzo et al. 2012).

Наблюдава се значителен ефект от включването на палмово брашно в диетата, по-специално върху активността на панкреатичния липазен ензим при бройлери (фигура 1). Лечението с включване на 15% палмово брашно повишава значително активността на ензима по отношение на останалите обработки. Леченията с 5 и 10% не се различават помежду си. Контролата беше лечението, което показа най-малко активност (P Barberá 2016).

Фигура 1 Ензимна активност на панкреатичната липаза при бройлери, консумиращи различни нива на брашно от царски палмови ядки

Според Gonçalves et al. (2010), хранителни фактори като вторични метаболити, също могат да модифицират активността на панкреатичната липаза. Тези автори заявяват, че липсата на високомолекулни полимерни флавоноиди, на които се приписва действието на инхибиране на активността на панкреатичната липаза, чрез упражняване на специфично взаимодействие с ензима, обикновено присъстват в плодове с интензивни цветове, като гроздето. Въпреки че плодовете на палмата имат чернокафяв цвят, при качествения фитохимичен скрининг, проведен върху брашното от този плод, е изключено наличието на вторични метаболити (Ly et al. 2017), което би обяснило резултата, който беше получени.

Barberá (2016) демонстрира, че промените в състава на диетата, включващи различни източници на липиди и мастни киселини, могат да причинят модификации в активността на липазния ензим. Въпреки че е важно да се има предвид, че секретите на панкреаса реагират на хранителен стимул, активността на тези ензими, след като попаднат в чревната лигавица, може да бъде повлияна и при бройлери (León et al. 2014), както се наблюдава в настоящото проучване.

Повишената активност на панкреатичната липаза може да увеличи усвояването на липидите, което може да бъде от полза за животното, тъй като е известно, че тези биомолекули изпълняват няколко важни биологични функции в организма. Сред тях може да се спомене, че те представляват структурни компоненти на мембраните, както и форми на транспорт и съхранение на катаболно гориво. Те действат и като защитно покритие на клетъчната повърхност, което е свързано с разпознаването на клетъчните клетки, видовата специфичност и тъканния имунитет. Те също имат интензивна биологична активност, тъй като някои витамини (A, B, D, E и K) и хормоните са сред тях.

Заключението е, че включването на брашно от палмови плодове в диети за бройлери повишава активността на панкреатичния ензим липаза, което прави възможно липидите да се усвояват в стомашно-чревния тракт.

Barberá, A. 2016. Влияние на матрицата и вида мазнини върху усвояемостта на липидите и протеините на някои рибни продукти. Докторска дисертация. Escola Tècnica Superior d’Enginyeria Agronòmica i del Medi Natural, Polytechnic University of València, València, Spain. стр. 42 [Връзки]

Брадфорд, М.М. 1976. „Бърз и чувствителен метод за количествено определяне на микрограмни количества протеин, използващ принципа на свързване с протеин-багрило“. Аналитична биохимия, 72 (1-2): 248-254, ISSN: 0003-2697, DOI: 10.1016/0003-2697 (76) 90527-3 [Връзки]

Di Rienzo, J.A., Casanoves, F., Balzarini, M.G., González, L., Tablada, M. & Robledo, C.W. 2012. InfoStat. версия 2012, [Windows], Национален университет в Кордоба, Аржентина: Grupo InfoStat. Налично: http://www.infostat.com.ar [Връзки]

Дънкан, Д.Б. 1955. „Тестове с множество обхвати и множество F“. Биометрия, 11 (1): 1-42, ISSN: 0006341X, DOI: 10.2307/3001478 [Връзки]

Goncalves, R., Mateus, N. & De Freitas, V. 2010. „Изследване на взаимодействието на панкреатичната липаза с процианидини чрез оптични и ензимни методи”. Вестник по селскостопанска и хранителна химия, 58 (22): 11901-11906, ISSN: 0021- 8561, DOI: 10.1021/jf103026x [Връзки]

León, M. V, Colina, J.J., Rico, D., Araque, H., Rossini, M., Castañeda, M.V & de Arvelo, E.E.R. 2014. „Активност на панкреатичния трипсин и липазните ензими при прасета, хранени с брашно пиджигуао (Bactris gasipaes HBK) и синтетичен лизин“. Вестник на Факултета по ветеринарни науки, UCV, 55 (1): 11-17, ISSN: 0258-6576 [Връзки]

Ly, J., Ayala, L. & Delgado, E.J. 2017. „Хранителна стойност на палмис при прасета и фактори, които го влияят“. Изследване на животновъдството за развитие на селските райони, 29 (4), Налично: https://www.lrrd.cipav.org.co/lrrd29/4/ly29064.html [Връзки]

N.R.C. (Национален съвет за научни изследвания). 1994. Изисквания към хранителните вещества на домашните птици. 9-и преработен изд. Изд. National Academies Press, Вашингтон, САЩ, САЩ. стр. 176, ISBN: 0309048923 [Връзки]

Oliva, D., Martínez, M., Jiménez, L. & Ly, J. 2018. „Характеристики на производителността на растящите прасета, хранени с диети от брашно от царски палмови ядки“. Кубински вестник за селскостопанска наука, 52 (2): 1-8, ISSN: 2079-3480. [Връзки]

Tietz, N.W. & Fiereck, E.A. 1966. "Специфичен метод за определяне на серумна липаза". Clinica Chimica Acta, 13 (3): 352-358, ISSN: 0009-8981, DOI: 10.1016/0009-8981 (66) 90215-4. [Връзки]

Получено: 29 юли 2019 г .; Одобрен: 08 януари 2020 г.