Разработен е спектрофотометричен анализ, който показва голям потенциал за използване като анализ на точката на грижа (POC) за бързо откриване на антитела срещу цьолиакия.

Целиакия (CD) е автоимунно разстройство, което обикновено се проявява с неспецифични стомашно-чревни симптоми. Засяга приблизително 1% от населението на света и повече от 90% от случаите са недиагностицирани или погрешно диагностицирани. Понастоящем диагнозата CD се основава на серологията и чревната биопсия и като тест от първа линия се препоръчва откриването на IgA антитела срещу тъканната трансглутаминаза (tTG). Ензимните имуноанализи (EIAs) са утвърденият метод за откриване на антитела срещу tTG, докато съществуващите тестове за точка на грижа (POC) нямат чувствителност и/или специфичност. Подобрените методи на POC могат да помогнат за намаляване на недостатъчната диагноза и диагностичното забавяне на CD.

анализ

В тази връзка изследователи от Университета в Хелзинки (Финландия) формулираха анализ за откриване на антитела срещу tTG чрез модифициране на бърз и хомогенен имуноанализ, базиран на разрешен във времето резонансен трансфер на енергия на Förster (TR-FRET), разработен за серодиагностиката на ханта и инфекции с вируса Zika.

TR-FRET е явление, което се случва, когато два флуорофора, донор и акцептор, са много близки. Възбуждането на донора води до прехвърляне на енергия към акцептора, който след това излъчва енергията с характерна дължина на вълната. Ефективността на TR-FRET обратно зависи от разстоянието между двата флуорофора. Фоновата автофлуоресценция е сведена до минимум чрез измерване, разрешено във времето, разрешено от хелатни лантанидни флуорофори с дълъг полуживот на флуоресценция. TR-FRET се използва широко в изследвания и диагностика за изследване на протеиново-протеиновите взаимодействия и маркерите на заболяванията.

Изследователите модифицираха бърз метод за откриване на антитела, основан на TR-FRET, без измиване, като го свързваха с антитяло-свързващия протеин, "L-протеин" (LFRET). LFRET използва белязан донорен антиген и белязан акцепторен протеин L, който свързва каппа леките вериги от всички класове имуноглобулини. Ако клиничният образец съдържа антитела към антигена, те ще сближат флуорофорите, докато не са много близо един до друг. Следователно, TR-FRET сигналът показва, че пробата съдържа антителата, които представляват интерес. LFRET сигналът може да бъде измерен без необходимост от допълнителни стъпки малко след комбиниране на пробата със сместа от реагенти, което позволява бърза диагностика на точката на грижа.

За проучването с антитела срещу tTG, изследователите оцениха 74 пациенти с CD с потвърдена биопсия и 70 здрави контроли, с: 1) новия анализ на tTG-LFRET и за справка; 2) добре установена EIA и 3) съществуващ тест POC търговски. Изчерпването на IgG се използва за разграничаване на анти-tTG IgA и IgG позитивността.

Резултатите разкриха, че чувствителността и специфичността на първо поколение tTG-LFRET POC анализ за откриване на CD са съответно 87,8% и 94,3%, в съответствие с тези на референтния POC тест. За сравнение, чувствителността и специфичността на ОВОС са съответно 95,9% и 91,9%.

„Ефективността на теста беше сравнима с настоящите методи. Преобладаващият метод е транспортирането на пробата до централна лаборатория и многоетапна процедура, която отнема няколко часа. С новия метод резултатите могат да бъдат получени за по-малко от половин час, като просто се комбинират пробата и сместа от реагенти, изчака се малко и се прочетат резултатите “, каза първият автор д-р Джуусо Русанен, изследовател от Университета в Хелзинки. „Надяваме се, че нашият бърз метод може да понижи прага за откриване на цьолиакия и по този начин да помогне за преодоляване на обширната диагноза на това относително често срещано състояние. Освен това за първи път новият метод се използва за диагностика на автоимунно заболяване. Това е обещаващ резултат и подтиква разработването на подобни тестове за диагностика на други автоимунни заболявания ".

Изследването е публикувано в онлайн изданието на списание PLOS One от 26 ноември 2019 г.